Тариф осаго 2019: Тарифы ОСАГО на 2019 год: данные Центробанка

Вместо нынешних четырех категорий Центробанк раздробил соответствующую таблицу на пятьдесят восемь категорий. Коэффициент для самых молодых и неопытных автолюбителей вырос до 1,87, а самые опытные и возрастные водители теперь получат своеобразную скидку в дополнение к Кбм. Для них коэффициент возраста и стажа равняется 0,93.

В итоге обновленная таблица должна максимально индивидуализировать стоимость обязательной автостраховки в зависимости от опыта водителя, а также его возрастной группы.

Предельная цена услуги

Из тарифного руководства Центробанка исчез один крайне важный пункт. В действующей редакции этого документа сказано, что максимальная стоимость полиса не должна было больше базовой ставки по конкретному виду транспорт с учетом коэффициента территории, умноженной на три.

Соответственно, в 2019 году максимальная стоимость автогражданки определяется исключительно путем перемножения базовой ставки на поправочные коэффициенты.

ЦБ разрешит страховщикам поднять тарифы ОСАГО на 10% для плохих водителей :: Финансы :: РБК

В ЦБ считают, что расширение тарифного коридора не приведет к росту цен на полисы ОСАГО и массовому пересмотру стоимости страховок к верхней границе коридора. «Какие-то изменения если и будут, то точечные и будут касаться наиболее аварийных водителей», — подчеркнул Чистюхин.

Что произойдет на втором этапе реформы ОСАГО

Либерализация тарифов в ОСАГО в России началась с 2019 году — с тех пор в России для расчета стоимости обязательной автомобильной страховки применяется тарифный коридор, установленный ЦБ. Страховщик имеет право внутри этого коридора выбрать базовую ставку. Затем к ней применяются повышающие или понижающие коэффициенты, за счет которых будет сформирована итоговая стоимость полиса для конкретного водителя и автомобиля.

С 24 августа начнут применять новые подходы к расчету стоимости полисов ОСАГО. В частности, отменяется применение регионального коэффициента и коэффициента мощности автомобиля. При этом страховщики смогут учитывать в тарифе факты грубого нарушения водителем Правил дорожного движения — и повышать стоимость страховок для таких лиц.

Страховые компании также обязаны будут раскрывать на своих сайтах факторы, которые влияют на стоимость их полисов ОСАГО. Клиенты смогут проверить расчеты страховщиков на специальных тарифных калькуляторах.

Читайте на РБК Pro

«Как показывает опыт первого этапа индивидуализации тарифов ОСАГО, страховые компании заинтересованы в хороших водителях и конкурируют за таких клиентов. Так, в результате расширения тарифного коридора в начале 2019 года на 20% вниз и вверх средняя премия по ОСАГО за 2019 год снизилась на 4,8%», — отмечается в сообщении ЦБ.

Дополнения к реформе от ЦБ

Банк России внесет уточняющие параметры к закону об ОСАГО, пояснил Чистюхин. ЦБ, в частности, определит факторы, которые будет запрещено использовать для расчета стоимости полисов. Например, на цену страховки не должны влиять аспекты, связанные с национальной, языковой, расовой принадлежностью водителя, его политическими взглядами, должностным положением или вероисповеданием.

«Это факторы, которые носят явный дискриминационный характер, и мы полагаем, что их использовать никоим образом страховые компании не смогут, чтобы определять настройку тарифа», — подчеркнул зампред ЦБ. Он не исключил, что Банк России в будущем может дополнять перечень таких «запретных» факторов.

В дополнение к расширению тарифного коридора ОСАГО ЦБ намерен скорректировать значение коэффициента возраста и стажа (КВС) водителя, которые влияют на стоимость полисов.

«Мы начали это еще в прошлом году, максимальное изменение внутри группы, как и в прошлый раз, ограничено 4%. При этом можно сказать, что водители более старшего возраста и более опытные будут иметь дополнительные скидки. Для них значение коэффициента «возраст-стаж» снижается», — пояснил Чистюхин. По его словам, максимальное увеличение этого коэффициента затронет водителей в возрасте 22–24 лет со стажем вождения 3–4 года — для этой группы КВС вырастает на 3,8%.

«Росгосстрах» снижает тарифы на ОСАГО для автомобилистов на 69 территориях | Пресс-центр | 26.02.2019

Дата публикации: 26.02.2019

«Как мы и обещали в начале этого года, когда Банк России своим указанием расширил тарифный коридор в ОСАГО, «Росгосстрах» намерен предпринимать какие-либо шаги только после всестороннего анализа экономики «автогражданки» для того или иного региона и изучения действий конкурентного окружения. Первый этап этой аналитической работы показал, что сейчас мы имеем возможность снизить тариф для граждан-владельцев ТС категории «В» и «BE» в целом ряде территорий: где-то сразу по всему региону, а где-то — в отдельных городах или населенных пунктах», — пояснил он.

Список территорий, где «Росгосстрах» снижает тариф, размещен на официальном сайте компании www.RGS.ru. Наиболее ощутимым изменение будет для автовладельцев Удмуртии и Республики Коми, где базовые ставки были снижены сразу на 15% и 14,9% соответственно. Значительным снижение будет также в Костроме (14,4%) и ряде населенных пунктов Тульской области (13,6%) и Пермского края (11,4%), в Москве и Московской области (10,2%). «Для автовладельцев на остальных территориях страны, не входящих в перечень из 69 территориальных групп преимущественного использования ТС, ставки пока остаются неизменными — какими они были в прошлом году», — уточнил Дмитрий Пурсанов.

Это — первый случай после выхода указания ЦБ о тарифном коридоре, когда крупный страховщик идет на снижение ставок в ряде территорий, не прибегая одновременно к увеличению базового тарифа в других. И это тем более примечательно, что «Росгосстрах» в 2019 году уже несколько увеличил свою долю в сегменте ОСАГО на рынке. Как сообщил в конце минувшей недели Генеральный директор компании Николаус Фрай, сейчас по количеству договоров доля «Росгосстраха» достигла порядка 13,5%.

Правила и тарифы

Новые тарифы ОСАГО в 2019 году: как изменится стоимость полиса?

Фото: Юлия ПЫХАЛОВА.

Завтра, 16 января, в пресс-центре «Комсомольской правды» состоится пресс-конференция по вопросам изменения тарифов ОСАГО.

С 9 января 2019 года ценовой коридор полиса ОСАГО расширился. Смещение произошло на 20% вверх и вниз. Ряд автовладельцев сможет рассчитывать на снижение стоимости. Для иных граждан нововведение повлечет за собой повышение цены ОСАГО.

1) Основные составляющие стоимости полиса ОСАГО.

2) Базовая ставка: сколько она составляет, и почему страховые компании вправе самостоятельно установить значение показателя?

3) Почему повышение тарифов не затронет владельцев мотоциклов?

4) Ценовые коридоры полисов ОСАГО с 9 января 2019 года. Как изменятся тарифные коридоры для легковых автомобилей юридических лиц и такси?

5) Для кого стоимость полиса ОСАГО возрастет максимально на 20%?

6) Если автовладелец использует услуги одной компании, снизится ли для него стоимость полиса ОСАГО?

7) Коэффициент бонус-малус: кто получит скидку, а кого ждет повышение стоимости?

8) Полис ОСАГО без ограничений: каким категориям автовладельцев это выгодно, и на сколько подорожает стоимость страхования?

9) Возраст и стаж водителя: насколько изменится стоимость полиса?

10) Определение водительского стажа: какие изменения вступили в силу?

11) Коэффициент безаварийного вождения: насколько изменился, является ли единым во всех страховых компаниях и сколько составляет?

12) Дальнейшее расширение границ тарифного коридора на 30% и 40% — когда ожидать?

13) Индивидуальный тариф — что это такое и когда он появится?

На эти и другие вопросы ответят первый заместитель генерального директора, директор по страхованию ПАО «АСКО-Страхование» Алексей Любавин и директор по развитию ПАО «АСКО-Страхование» Инна Щеткина.

Пресс-конференция состоится 16 января 2018 года по адресу: г.Челябинск, ул.Красная, 4, 6-й этаж, пресс-центр «Комсомольской правды». Начало — в 11.00. Дополнительная информация по телефону: 8 922 632 78 71.

Правила и тарифы компании МАКС

Правила и тарифы

Употребление табака среди молодежи: результаты Национального исследования употребления табака среди молодежи

Результаты 2020 года в отношении всех видов употребления табака

Данные показывают, что потребление любых табачных изделий среди молодежи сокращается: по оценкам, в 2020 г. на 1,73 миллиона молодых людей будет меньше употреблять какие-либо табачные изделия (4,47 миллиона) по сравнению с 2019 годом (6,20 миллиона).

Результаты показали, что 23,6% старшеклассников и 6,7% учеников средней школы сообщили, что в настоящее время употребляли какие-либо табачные изделия в 2020 году. Кроме того, в настоящее время снизилось потребление любых горючих табачных изделий, различных табачных изделий, электронных сигарет, сигар и бездымного табака. среди учащихся старших и средних школ в период с 2019 по 2020 годы.Несмотря на это обнадеживающее снижение, исследование не показало значительного сокращения употребления сигарет, кальяна, трубочного табака или нагретых табачных изделий.

Читать отчет полностью:

Данные об использовании электронных сигарет, 2020 г.

Осенью 2020 года FDA и CDC опубликовали результаты Национального исследования употребления табака среди молодежи 2020 года, показывающие, что в настоящее время электронные сигареты используют на 1,8 миллиона меньше молодых людей в США, чем в прошлом году. Однако с 2011 года потребление электронных сигарет среди молодежи резко возросло 3.6 миллионов молодых людей все еще используют электронные сигареты. Более того, данные показывают тревожный рост числа молодых людей, которые используют одноразовые электронные сигареты, и более 8 из 10 молодых пользователей электронных сигарет сообщают об использовании ароматизированных продуктов. Кроме того, почти 40 процентов пользователей средней школы используют электронные сигареты 20 или более дней в месяц, и почти четверть из них используют электронные сигареты каждый день, что указывает на сильную зависимость от никотина среди молодежи.

Загрузить полную инфографику

Читать отчет полностью:

Узнайте о Молодежном плане по профилактике употребления табака и текущих стратегиях FDA по сокращению доступа молодежи к электронным сигаретам и их использования.

Голы NYTS

FDA придерживается научно обоснованного подхода к решению проблем общественного здравоохранения, связанных с употреблением табака. Мы сотрудничаем с CDC в проведении репрезентативного на национальном уровне опроса учащихся средних и старших классов, посвященного исключительно употреблению табака. NYTS была разработана для предоставления национальных данных по долгосрочным, промежуточным и краткосрочным показателям, ключевым для разработки, реализации и оценки комплексных программ профилактики табака и борьбы с ним.

Дополнительные ресурсы

Регистрационные расходы | Транспорт и автомобили

Стоимость регистрации зависит от того, что вы регистрируете — автомобиль, мотоцикл, прицеп, грузовик или лодку, а также от того, хотите ли вы регистрацию на 6 или 12 месяцев.

Сколько будет стоить моя регистрация?

Чтобы получить точное ценовое предложение, убедитесь, что вы знаете:

• тип регистрации — новая или продленная
• тип транспортного средства, которое вы регистрируете — например, легковой автомобиль, мотоцикл или легкий коммерческий транспорт
• транспортное средство спецификации — например, количество цилиндров (для легких транспортных средств) или количество осей (для тяжелых транспортных средств)
• , если вы имеете право на льготу при регистрации
• название вашей страховой компании CTP, если вы включаете ОСАГО в цитата
• , если вы продляете регистрацию на срок менее 12 месяцев, вам придется заплатить дополнительную плату.

Дополнительная плата покрывает обновление реестра транспортных средств и другие расходы, связанные с подготовкой и распространением дополнительных регистрационных извещений.

Когда вы регистрируете свой автомобиль, сборы, которые вы платите, помогают строить новые дороги и поддерживать дорожную сеть.

Плата за регистрацию состоит из 3 частей:

• регистрационный сбор
• плата за улучшение дорожного движения
• взнос по обязательному страхованию третьих лиц (ОСАГО).

Сбор за регистрацию и улучшение дорожного движения помогает строить и содержать дороги, а страховой взнос ОСАГО обеспечивает страховое покрытие ОСАГО для вашей регистрации.

Когда истечет срок вашей текущей регистрации, вы получите по почте уведомление о регистрации с информацией о расходах и о том, как продлить регистрацию.

Убедитесь, что вы продлили регистрацию в установленный срок или раньше, иначе транспортным средством нельзя будет управлять по закону — за просрочку платежа взимается штраф.

Регистрационные сборы

С 1 июля 2021 года сборы за регистрацию транспортных средств увеличатся на 1,7% и будут применяться к условиям регистрации, начинающимся 1 июля 2021 года или после этой даты.Это будет связано с платой за улучшение трафика и регистрационным сбором.

Взносы по обязательному страхованию третьих лиц (ОСАГО), которые взимаются при регистрации, регулируются Комиссией по страхованию от несчастных случаев и пересматриваются ежеквартально.

Регистрационные сборы для тяжелых транспортных средств

Регистрационные сборы на тяжелые транспортные средства регулируются на национальном уровне. С 1 июля 2021 года компонент платы за использование большегрузных транспортных средств увеличится на 2,5%, а нормативный компонент останется замороженным до 30 июня 2022 года.Узнайте больше о сборах за регистрацию тяжелых транспортных средств, включая сборы по типам транспортных средств.

Регистрационный взнос для обычных транспортных средств

Обратите внимание на : следующие таблицы регистрационных сборов являются ориентировочными только для 12-месячного периода регистрации с использованием страховых взносов ОСАГО 1 класса.

Регистрационный сбор для держателей льготных карт

Обратите внимание, : следующие таблицы регистрационных сборов являются ориентировочными только для 12-месячного периода регистрации.

Другие сборы, связанные с регистрацией

Возможно, вам придется оплатить другие регистрационные сборы за свой автомобиль.

Прочие сборы включают передачу транспортного средства / номерного знака, номерные знаки, которые включают дополнительные номера, разрешение на перемещение незарегистрированного транспортного средства, прицепа, автоприцепа и плату за просрочку платежа.

Узнайте о персонализированной стоимости пластин.

Узнайте больше о стоимости индивидуальных и дополнительных табличек в Personalized Plates Queensland или позвонив в Департамент транспорта и магистралей по телефону 13 23 80.

Узнайте, как настроить свои пластины и получить дополнительную табличку.

Узнайте о возврате средств за неиспользованные разрешения на незарегистрированный транспорт.

Примечание: Транспортные средства, получающие помощь в случае засухи или стихийного бедствия, освобождаются от уплаты пени за просрочку платежа.

Комиссия за кредитную карту

Доплата кредитной картой будет добавлена ​​к общей сумме выплаты (дебетовой или кредитной карты).

Получить расценки на регистрацию

Получите бесплатное онлайн-предложение для регистрации вашего автомобиля, мотоцикла, прицепа, грузовика или лодки.

Вы можете использовать эту услугу для новых регистраций или продления регистрации.

автомобилистов сэкономили миллионы на страховании ОСАГО, снизив стоимость автомобиля rego

С июля, когда жители Южной Австралии получили возможность выбирать страховщика ОСАГО (AAMI, Allianz, QBE или SGIC), конкурирующего по услугам, ценам и другим льготам для страхователей, местные автомобилисты экономили до 114 долларов в год на ОСАГО. страхование личного легкового автомобиля.

Это соответствует потенциальной экономии до 200 долларов для типичного домохозяйства в Аделаиде с 1,8 автомобилями.

«Это огромная победа для потребителей, которые теперь могут еще больше увеличить свой доход, когда дело доходит до обновления их автомобилей», — сказал казначей Лукас.

В настоящее время все четыре страховщика установили свои страховые взносы для частных пассажирских транспортных средств на самом низком уровне диапазона, установленного независимым регулирующим органом ОСАГО. Например, для мегаполиса премия 2019-20 в размере 296 долларов.77 — это экономия $ 114,48, или 28%, по сравнению с премией 2018-19 гг.

Между тем, независимый регулирующий орган сегодня опубликовал изменения в границах рейтингового округа ОСАГО — в отношении места, в котором находится транспортное средство, — которые затронут примерно 31 000 из 993 000 владельцев автотранспортных средств штата (44 000 из 1,5 миллиона индивидуальных транспортных средств). .

Чтобы вступить в силу с июля этого года, примерно 19 000 владельцев автотранспортных средств (28 000 автомобилей) переедут из Района 1 (представляющего более густонаселенные районы и более частые претензии) в Район 2 (менее населенные и меньшая частота претензий).Если использовать самую низкую ежегодную премию, предлагаемую сегодня, в качестве показателя, это означает снижение премии на 96 долларов или 32% для владельцев частных легковых автомобилей.

Таким образом, всего за два года эти автомобилисты сэкономят 210 долларов на страховке ОСАГО.

Различные классы транспортных средств, включая пассажирские и грузовые автомобили общего пользования, будут иметь разную степень изменения премий.

Эти автомобилисты в основном проживают в Аделаидских холмах, включая Олдгейт, Лобетхал и Окбанк.

Еще 12 000 владельцев автотранспортных средств (16 000 автомобилей) в четырех пригородах (Алдинга-Бич, Селликс-Бич, Льюистон и Ту-Уэллс) переедут из Района 2 в Район 1, что отражает их более высокую численность населения, большую частоту претензий, а также приведение их в соответствие со 136 пригородами, которые соответствуют тем же критериям и уже находятся в Районе 1.

«Хотя это решение принято независимым регулирующим органом на основании претензий и данных о гаражах, подавляющее большинство владельцев автомобилей в результате выиграют. об изменениях », — сказал г-н Лукас.

«И из тех, кто в настоящее время переезжает из округа 2 в округ 1, я сообщил, что эти автомобилисты платили 267,50 долларов в 2018-19 годах, которые затем снизились до 201,03 доллара в этом году по модели полного конкурса. Изменения границ, которые вступят в силу в июле, доведут их до 296,77 доллара «.

Для получения более подробной информации об изменении границы округа: www.ctp.sa.gov.au

Справочная информация:

Решения, касающиеся границы страхового округа ОСАГО, принимаются полностью Независимым регулирующим органом и , а не решения, принятые Правительством.

Независимому регулирующему органу были предоставлены эти полномочия в соответствии с законодательством, принятым бывшим лейбористским правительством в 2016 году.

Окончательные страховые взносы зависят от определения регулирующим органом ОСАГО верхнего и нижнего пределов страховых взносов для каждого класса транспортных средств и выбранных страховщиками взносов в рамках этих параметров. .

автомобилей 2020

Быстрая статистика

• Средние расходы на владение двумя автомобилями в семье в 2019 году составили 16 912 долларов
• Городские домохозяйства платят больше, чем региональные домохозяйства, за транспортные расходы 18 596 долларов против 14 988 долларов.
• Средняя стоимость транспорта для австралийской семьи составляет 13,8 процента от общего годового дохода.

Стоимость эксплуатации авто в неделю

Общие годовые расходы на транспорт зависят от того, где вы живете в Австралии. Следующие расходы разделены на две категории: городские и региональные домохозяйства. Подсчитано, что в среднем домохозяйстве используется два автомобиля. Среднее региональное домохозяйство платит больше за расходы, связанные с большими расстояниями, такие как расходы на топливо и техническое обслуживание.Городское домохозяйство с большей вероятностью будет платить больше за регистрацию, ОСАГО и различные налоги и сборы, такие как платные дороги.

Выплаты по автокредиту

Время года, когда приобретается автомобиль, влияет на стоимость покупки нового автомобиля и, соответственно, на сумму кредита и процентные ставки. В 2019 году произошло снижение транспортных расходов по погашению автокредитов. Средние еженедельные расходы домохозяйства с двумя автомобилями в крупных городах Австралии на погашение автокредита составляли 130 долларов.90, а средняя недельная стоимость в региональном городе в Австралии составляла 130,85 доллара.

Стоимость регистрации, ОСАГО и лицензии

Стоимость регистрации, ОСАГО и лицензирования остается стабильно ниже в региональных городах по всей Австралии, в результате того, что Новый Южный Уэльс, Виктория и Южная Австралия применяют различные политики, которые допускают различные структуры ценообразования в региональных и городских районах.

Средняя недельная стоимость для домашних хозяйств в крупных городах Австралии составляла 29 долларов.53, а средняя недельная стоимость в региональных городах Австралии составляла 27,90 долларов.

Затраты на комплексное страхование

Комплексное страхование — это дополнительное страхование, которое покрывает транспортные средства в случае повреждения транспортного средства, кражи, столкновений, вандализма или погодных повреждений. 34% несчастных случаев со смертельным исходом происходит в мегаполисах по всей стране, что может способствовать снижению затрат на страхование для тех, кто живет за пределами крупных городов.

Средняя недельная стоимость проживания в семье из двух автомобилей в крупных городах Австралии составляла 24 доллара.87, а средняя недельная стоимость в региональных городах Австралии составляла 19,73 доллара.

Затраты на обслуживание и шины

Эти расходы зависят от степени износа транспортного средства от вождения. Специалисты рекомендуют проверять шины, если они не заменяются каждые 5 лет. Обслуживание рекомендуется каждые 12 месяцев или каждые 15 000 километров, в зависимости от того, что наступит раньше.

Средняя недельная стоимость семьи из двух автомобилей в крупных городах Австралии составляла 29 долларов.41, а средняя недельная стоимость в регионах Австралии составляла 27,86 долларов.

Расходы на топливо

Повышение цен на топливо больше всего повлияло на рост стоимости владения автомобилями. В 2019 году цены на топливо выросли во всех столицах и региональных центрах, кроме Алис-Спрингс.

Средняя недельная стоимость в крупных городах Австралии составляла 76,23 доллара, а средняя недельная стоимость в регионах Австралии — 79,82 доллара.

Стоимость платных дорог

Платная дорога может быть частной или общественной, за которую пользователи должны платить.Сборы обычно устанавливаются для возмещения затрат на строительство и содержание дорог. Только в трех штатах Австралии действуют платные дороги: в Новом Южном Уэльсе, Виктории и Квинсленде, и только в крупных городах.

В этих городах были зарегистрированы средние расходы на дорожные сборы в Австралии: Сидней, Мельбурн и Брисбен. В Сиднее были самые высокие средние расходы на дорожные сборы — 84,60 доллара в неделю, за ним следуют Мельбурн — 50,80 доллара и Брисбен — 51,90 доллара.

Помощь на дороге

В 2019 году средний показатель по стране на помощь на дорогах составил 2 доллара.08 в неделю. Помощь на дороге — это дополнительная плата, предназначенная для покрытия расходов на поломку автомобиля, таких как мелкий механический ремонт, буксировка, спущенные шины и проблемы с аккумулятором, экстренная доставка топлива и услуги блокировки. Сбор обычно выплачивается единовременно в год. Обычно нет разницы между мегаполисами и региональными городами, так как службы помощи на дорогах предлагают стандартные цены для всего штата.

Еженедельные расходы на топливо в столице

Еженедельные эксплуатационные расходы по региону

Новый Южный Уэльс

Крупные города

Сидней был самым дорогим городом по общим транспортным расходам: в среднем расходы составляли 22 250 долларов.88 в 2019 году на семью. Это рост по сравнению с 22 108,61 доллара в 2018 году. Транспортные расходы составляют 14,4% от среднего общего дохода семьи в Сиднее.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Вагга-Вагга в 2019 году составили 13 601,50 долларов, что делает его самым доступным региональным городом в стране по общим транспортным расходам. Транспортные расходы составляют 9,7% от среднего общего дохода семьи в Вагга-Вагга, что является лучшим показателем для региональных городов Австралии.

Виктория

Крупные города

Мельбурн был вторым самым дорогим городом по общим транспортным расходам со средними расходами в размере 20 865,73 долларов в год. Это рост по сравнению с 20 115,52 долларов в 2018 году. Транспортные расходы составляют 15,3% от среднего общего дохода семьи в Виктории.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Джилонге составляли 13 601 доллар.50 в 2019 году, что делает его самым дорогим регионом Австралии по общим транспортным расходам. Транспортные расходы составляют 12,2% от среднего общего дохода семьи в Джилонге.

Квинсленд

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Брисбене составили 20 582,23 доллара США в 2019 году. Это было увеличение с 19844,71 доллара США в 2018 году. Транспортные расходы составляют 16,3% от среднего общего дохода семьи в Брисбене.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Таунсвилле составили 13 960,44 долларов США в 2019 году. Это было увеличение с 13 578,52 долларов США в 2018 году. Транспортные расходы составляли 11,6% от среднего общего дохода семьи в Таунсвилле.

Западная Австралия

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Перте в 2019 году составили 17 993,95 долларов США. Это увеличение по сравнению с 17 830 долларами США.67 за 2018 год. Транспортные расходы составляют 13,8% от среднего общего дохода семьи в Перте.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Банбери составили 15 668,64 доллара в 2019 году. Транспортные расходы составляют 13,1% от среднего общего дохода семьи в Банбери. Банбери был самым дорогим регионом с точки зрения регистрации, ОСАГО, лицензионных затрат и топлива.

Южная Австралия

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Аделаиде составляли 16 896 долларов США.91 в 2019 году. Это рост по сравнению с 16 282,62 доллара в 2018 году. Транспортные расходы составляют 14,1% от среднего общего дохода семьи в Аделаиде.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Маунт-Гамбье составили 14 880,54 долларов в 2019 году. Это увеличение по сравнению с 14 495,59 долларов в 2018 году. Транспортные расходы составляют 13,9% от среднего общего дохода семьи в Маунт-Гамбье.

Тасмания

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Хобарте составляли 16 166 долларов.64 в 2019 году. Это рост по сравнению с 15747,11 долларов в 2018 году. Транспортные расходы составили 16,8% от среднего общего дохода семьи в Хобарте.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Лонсестоне составили 14 815,88 долларов США в 2019 году. Транспортные расходы составили 16,9% от среднего общего дохода семьи в Лонсестоне, что является самым высоким показателем из всех рассматриваемых региональных городов.

Северная территория

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Дарвине составляли 16 529 долларов.86 в 2019 году. Это больше по сравнению с 16 376,91 доллара в 2018 году. Транспортные расходы составляют 13,5% от среднего общего дохода семьи в Дарвине.

Региональные районы

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Алис-Спрингс составили 15 887,16 долларов США в 2019 году. Это увеличение по сравнению с 15643,60 долларов США в 2018 году. Транспортные расходы составляют 13,8% от среднего общего дохода семьи в Алис-Спрингс.

территория столицы Австралии

Крупные города

Среднегодовые общие транспортные расходы для семьи в Канберре составляли 17 478 долларов США.65 в 2019 году. Это меньше по сравнению с 17 513,10 долларов в 2018 году. Транспортные расходы составляют 12,3% от среднего общего дохода семьи в Канберре.

Из-за небольшого размера ACT и минимальной дифференциации между пригородами, региональное местоположение не использовалось для анализа средних затрат.

Тип автомобиля

Тип автомобиля, которым вы управляете, играет большую роль в определении общих годовых эксплуатационных расходов. Расход и тип топлива, первоначальная стоимость автомобиля, его возраст, вопросы амортизации и технического обслуживания — все это влияет на сумму, которую автовладелец платит за автомобиль.

Городские Машины

Например, Audi A1, Suzuki Ignis, Skoda Fabia

• Средняя начальная стоимость городского автомобиля 20 593 $
• Средние затраты на топливо для городского автомобиля на пробеге более 15000 км составляют 926 долларов
• Средний расход топлива для городского автомобиля составляет 4,6 л / 100 км.

Маленькие автомобили

Например, Сузуки Свифт, Фольксваген Поло 66TSI, Киа Пиканто

• Средняя начальная стоимость малолитражки составляет 15 890 долларов США
• Средние затраты на топливо для небольшого автомобиля, проехавшего более 15 000 км, составляют 967 долларов США
• Средний расход топлива для малолитражки — 4.9л / 100км

Маленький внедорожник

Например, Citroen Cactus, Renault Captur, Mazda CX-3

• Средняя начальная стоимость небольшого внедорожника 24 623 $
• Средние затраты на топливо для небольшого внедорожника при пробеге более 15000 км составляют 1003 долларов США.
• Средний расход топлива для небольшого внедорожника составляет 5,1 л / 100 км.

Средние автомобили

Например, Toyota Camry, Mercedes-Benz C200, Hyundai Sonata

• Средняя начальная стоимость среднего автомобиля 40 960 долларов
• Средние затраты на топливо для среднего автомобиля при пробеге более 15000 км составляют 1217 долларов США
• Средний расход топлива для средней машины — 6.2 л / 100 км

Средний внедорожник

Например, Mitsubishi Outlander PHEV, Peugeot 3008 GT, Ford Escape

• Средняя начальная стоимость среднего внедорожника составляет 42 823 долларов
• Средние затраты на топливо для среднего внедорожника на пробеге более 15000 км составляют 797 долларов
• Средний расход топлива для среднего внедорожника составляет 4,1 л / 100 км.

Спортивные автомобили

Например, Лотус Элиз, Порше Боксстер, Тойота 86

• Средняя начальная стоимость спорткара 74 626 долларов
• Средние затраты на топливо для спортивного автомобиля, проехавшего более 15000 км, составляют 1464 долларов США
• Средний расход топлива для спорткара — 7.2 л / 100 км

Роскошные автомобили

Например, Audi Q7, Mercedes-Benz S500e, Porsche Panamera

• Средняя начальная стоимость люксового автомобиля 303 366 долларов
• Средние затраты на топливо для роскошного автомобиля, проехавшего более 15000 км, составляют 502 доллара.
• Средний расход топлива для роскошного автомобиля составляет 2,5 л / 100 км.

границ | CTP-синтаза 2 из Arabidopsis thaliana необходима для полного развития эмбриона

Введение

Нуклеотиды являются важными строительными блоками для производства нуклеиновых кислот.Кроме того, нуклеотиды представляют собой основные носители энергии в биохимических реакциях и действуют как источник азота, углерода или фосфата в условиях ограничения азота и как кофакторы в биосинтезе фосфолипидов. По химической структуре нуклеотиды делятся на пурины и пиримидины (Kinney, 1993; Moffatt, Ashihara, 2002; Zrenner et al., 2006). У растений метаболизм нуклеотидов состоит из (i) синтеза de novo , (ii) утилизации и (iii) деградации (Zrenner et al., 2006). Синтез пиримидина de novo состоит из шести ферментативных стадий, распределяемых в хлоропласте, цитозоле и митохондриях, которые заканчиваются производством монофосфата уридина (UMP) в цитозоле. Этот промежуточный продукт фосфорилируется киназой UMP до UDP. Моно-, ди- и трифосфаты уридина уравновешиваются нуклеозиддифосфаткиназами. Последней стадией синтеза пиримидина de novo является аминирование UTP до цитидинтрифосфата (CTP), проводимое исключительно с помощью CTP-синтаз (CTPS) (Moffatt and Ashihara, 2002; Zrenner et al., 2006; Witz et al., 2012). CTP-синтазы представляют собой консервативное семейство ферментов, встречающееся во многих царствах. Потребность в CTP как части ДНК особенно высока во время деления клеток и в развивающихся тканях. Таким образом, было описано, что активность CTPS регулируется на разных уровнях, например, посттрансляционно (посредством фосфорилирования) и аллостерически (через GTP), или обратная связь ингибируется его продуктом CTP (Levitzki and Koshland, 1972; Chang and Carman, 2008). Еще одна ферментативная регуляция — это полимеризация в филаменты, которая была изучена на нескольких организмах, таких как Escherichia coli , Saccharomyces cerevisiae , Drosophila melanogaster и Homo sapiens (Liu, 2010; Barry et al., 2014; Noree et al., 2014; Lynch et al., 2017). CTPS растений были впервые описаны в документе Arabidopsis thaliana (далее именуемом Arabidopsis ) Daumann et al. (2018), описывая особенности пяти изоформ, включая способность образования филаментов. Изоформы демонстрируют тканеспецифические паттерны экспрессии, которые являются динамическими для CTPS1 и 4 при абиотических стрессах (Hruz et al., 2008; Daumann et al., 2018). Однако мутанты с единичным нокаутом не проявляли какого-либо фенотипа при режимах роста длинного или короткого дня, за исключением CTPS2.Нам не удалось получить гомозиготные линии вставки Т-ДНК для этой изоформы, что указывает на особую функцию во время развития или прорастания эмбриона (Daumann et al., 2018).

Шесть основных ферментативных стадий синтеза пиримидина de novo облегчаются пятью ферментами, каждый из которых кодируется одним геном. Гомозиготные нокаутные линии не могут быть получены, что указывает на существенную природу этого пути (Schröder et al., 2005). Антисмысловые линии аспартат-транскарбамоилазы (ATC) и дигидрооротазы (DHO), которые облегчают вторую и третью стадии синтеза пиримидина de novo , вызвали ограничения роста в Solanum tuberosum .Тем не менее, антисмысловые линии с 20% остаточного белка ATC или DHO были жизнеспособными и способны давать клубни. Более того, никаких изменений в пулах нуклеотидов не наблюдали в полностью развитых тканях, если экспрессия не упала ниже порогового значения, указывая на эффективное спасение нуклеотидов у старых растений (Schröder et al., 2005). Детальный анализ потомства гетерозиготных мутантов с потерей функции на ферментативных стадиях синтеза пурина и пиримидина de novo и пластидном пентозофосфатном пути (обеспечивающем субстраты для синтеза и восстановления нуклеотида de novo ) выявил остановку на ранней стадии. стадии развития эмбриона (Andriotis, Smith, 2019).Это наблюдение подчеркивает важность нуклеотидного гомеостаза в этих тканях. В соответствии с этими открытиями, большой набор генов, кодирующих белки центральных путей, был классифицирован как необходимый для развития эмбриона ( гены EMB ), включая гены, участвующие в синтезе нуклеиновых кислот (Meinke, 1985, 2020). В связи с тем, что синтезу пиримидина de novo способствуют ферменты, которые в основном кодируются отдельными генами, неудивительно, что гомозиготные нокауты любого из этих генов нежизнеспособны.Поскольку Arabidopsis содержит пять изоформ CTP-синтазы, которые теоретически могут быть избыточными по функции, было удивительно, что не удалось получить гомозиготный нокаут для изоформы 2 (Daumann et al., 2018).

Здесь мы сообщаем, что CTPS2 необходим для правильного развития эмбриона, предположительно потому, что синтез CTP из UTP необходим в тканях эмбриона. Кроме того, наблюдалась тканеспецифическая экспрессия CTPS2 в зародышах и прерывание семени в + / ctps2 Silique.Молодые корни проростков также обнаруживают специфическую для клеточного типа экспрессию, которая реагирует на экзогенно поставляемый ауксин.

Материалы и методы

Растения и условия роста

Arabidopsis thaliana Экотип Columbia [обозначенный как дикий тип (WT)] был использован в этом исследовании вместе с CTPS2 (At3g12670) линиями вставки Т-ДНК из коллекции GABI-Kat (Kleinboelting et al., 2012). Это были GABI_032C02 и GABI_156G07, обозначенные как + / ctps2-1 и + / ctps2-2 соответственно.Семена выращиваемых в почве растений высевали на стандартизированную почву ED73 (Einheitserde und Humuswerke Patzer, Бухенберг, Германия), инкубировали в течение 48 часов при 4 ° C для стратификации и переносили в камеры для выращивания в режиме длинного дня (14 часов света / 10 часов темноты. ). Условия роста: интенсивность света квантов 120 мкмоль м ^–2 с ^–1 , температура 22 ° C и влажность 60%. Анализ сегрегации и промотора проводили с семенами, стерилизованными на поверхности, на чашках с агаром 1/2 Murashige-Skoog (MS) (Murashige and Skoog, 1962), с добавлением витаминов, 1% сахарозы (мас. / Об.), 0.05% MES – KOH (мас. / Об.), PH 5,7 и 0,8% агар. Поверхность семян стерилизовали добавлением 500 мкл 70% этанола с добавлением 0,1% Triton X-100 в течение 5 минут на встряхивающем устройстве для встряхивания. После 1 мин центрифугирования при 5000 g в течение 1 мин супернатант отбрасывали и семена дважды промывали 100% этанолом в течение 1 мин. Раствор затравки / этанол немедленно переносили пипеткой на стерильную фильтровальную бумагу и сушили в потоке воздуха стерильного стола.

Строительство CTPS2 :: GFP / GUS и линий дополнения CTPS2

Для конструирования линий CTPS2 :: GFP / GUS 1002 п.н. выше стартового кодона амплифицировали с помощью ПЦР с использованием смыслового и антисмыслового праймеров CTPS2_Promoter (дополнительная таблица 1).Затем амплифицированную последовательность разделяли на агарозном геле (1% мас. / Об.) И выделяли расщеплением геля с помощью набора NucleoSpin ^® Extract II (Macherey Nagel, Düren). После этого присоединяли att-сайты с помощью другой реакции ПЦР, амплифицированные фрагменты выделяли, как описано выше, и использовали для клонирования шлюза (праймеры, перечисленные в дополнительной таблице 1). После интеграции в вектор входа pDONR (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) другая реакция Gateway вставила конструкцию в pBGWFS7.0 (Карими и др., 2002). Эта конструкция позволяет отслеживать активность ß-глюкуронидазы (GUS) и флуоресценцию зеленого флуоресцентного белка (GFP) из одной конструкции и одних и тех же трансформированных линий. Для простоты в соответствующих экспериментах мы обращаемся либо к CTPS2 :: GFP, либо к CTPS2 :: GUS. Трансформацию в растения Arabidopsis дикого типа проводили в соответствии с процедурой инокуляции цветков (Narusaka et al., 2012).

Комплементация + / ctps2-1 растений использовали 1,864 п.н. перед стартовым кодоном CTPS2 , т.е.е., полная вышестоящая межгенная область плюс кодирующая белок область, включающая интроны CTPS2 (Schwacke et al., 2003). Соответствующий участок амплифицировали с помощью ПЦР с CTPS2_full-lenth смысловым и антисмысловым праймерами (дополнительная таблица 1) на геномной ДНК дикого типа (gDNA). После ПЦР амплифицированная последовательность была вставлена ​​в вектор входа pDONR (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), как описано выше, и далее в pMDC123 для комплементации растений + / ctps2 (Curtis and Grossniklaus, 2003).Безошибочная амплификация и вставка вектора проверяли ферментным расщеплением и секвенированием по Сэнгеру (Seq-IT, Kaiserslautern, Германия). Праймеры, используемые для этого, перечислены в дополнительной таблице 1.

Конструкция комплементации CTPS2 была использована для трансформации растений + / ctps2-1 , как описано выше.

Световая микроскопия и подготовка проб

Стручки почвенных растений (WT и + / ctps2-1 ) собирали через 8–10 дней после внесения удобрений (DAF), продольно препарировали и помещали на предметное стекло микроскопа и покрывали парафильмом.Форму семян исследовали на 12–15 силиках DAF, которые сушили до 7 дней при комнатной температуре. Силиконы осторожно открывали под световым микроскопом и помещали на предметное стекло микроскопа, покрытое парафильмом для лучшего захвата. Здесь использовали растения WT, + / ctps2 и + / ctps2 растений, дополненные эндогенным CTPS2. Изображения были получены с помощью микроскопа Leica MZ10 F, оснащенного камерой Leica DFC420 C.

Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия и подготовка проб

развивающихся стилей промоторных линий CTPS2 :: GFP 1.5–8 DAF рассекали, семена выделяли и переносили в реакционные пробирки объемом 1,5 мл. После добавления 10 мкл ddH ₂ O на семя зародыши осторожно выдавливали горшечником. Раствор эмбрион / вода переносили на предметные стекла и сразу использовали для микроскопии. Для исследования корней растений CTPS2 :: GFP семена помещали на чашки с агаром 1/2 MS, содержащие 1% агара, и помещали вертикально в камеру для выращивания. В указанные моменты времени проростки помещали в раствор йодида пропидия (PI) (0.01 мг / мл) для окрашивания клеточной стенки с последующей конфокальной лазерной сканирующей микроскопией. Изображения на рисунках 3, 5, 6 были получены с помощью микроскопа Leica TCS SP5II. Возбуждение для GFP составляло 488 нм, а регистрация излучения проводилась при 505–540 нм. Автофлуоресценция хлорофилла эмбрионов и флуоресценция PI детектировались при эмиссии 514 нм и при возбуждении 651–704 нм с помощью водно-иммерсионного объектива HCX PL APO 63 × 1,2 Вт.

Изображения на рисунке 4 и дополнительных рисунках 1, 4 были получены с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа Zeiss LSM880, AxioObserver SP7 (INST 248 / 254-1), оснащенного Zeiss C-Apochromat 40 × 1.Водно-иммерсионный объектив AutoCorr M27 мощностью 2 Вт с настройками флуоресценции, как указано в работе Kaiser et al. (2019).

Изображения обрабатывали с использованием программного обеспечения Leica LAS X (версия 3.3) или Zeiss ZEN 2.3.

Лечение ауксином

Стерилизованные поверхности семена репортерных растений CTPS2 :: GFP помещали на чашки с агаром 1/2 MS и выращивали вертикально в течение 7 дней в камере длинного дня. После этого проростки переносили на 20 часов в чашки с агаром 1/2 MS, содержащим 250 нМ 1-нафталинуксусной кислоты (NAA).NAA солюбилизировали в 100% диметилсульфоксиде (ДМСО) и добавляли к теплой среде 1/2 MS перед разливом планшетов. В качестве контроля 250 нМ ДМСО добавляли к другой партии планшетов, и такое же количество проростков переносили в контрольные условия, как и для обработки NAA.

Флуоресценцию детектировали с помощью Zeiss LSM880, как упоминалось выше. Изображения были обработаны с помощью ImageJ (версия 1.51j8), и среднее значение серого дано по флуоресценции 10 клеток трихобласта в пяти биологических повторностях.

Статистический анализ

Все эксперименты проводились не менее трех раз. Пределы прямоугольника на графиках представляют 25–75-й процентиль, горизонтальная линия — медиана, маленькая светло-серая рамка — среднее, а усы — минимальные и максимальные значения.

Результаты

Анализ сегрегации с добавлением цитидина

Ранее мы идентифицировали две линии вставки CTPS2 Т-ДНК из коллекции Gabi-Kat, которые не могли давать гомозиготное потомство (Daumann et al., 2018). Эти гетерозиготные линии (GK_032C02 и GK_156G07) были обозначены как + / ctps2-1 и + / ctps2-2 соответственно. Предыдущий анализ сегрегации этих двух линий показал отклоняющуюся картину прорастания по сравнению с ожидаемым соотношением 1: 2: 1 для WT: гетерозиготного: гомозиготного потомства (Daumann et al., 2018). Таким образом, мы пришли к выводу, что ключевой функцией CTPS2, вероятно, является прорастание и / или развитие эмбриона. Чтобы подтвердить вышеупомянутую нерегулярность, мы повторили эксперимент в нашем исследовании и обнаружили, что почти 10% семян + / ctps2-1 и + / ctps2-2 , которые были посеяны на чашки с агаром 1/2 MS. не прорастали по сравнению с WT (Фигуры 1A, C), что указывает на гомозиготный нокаут CTPS2 в этих семенах.Поскольку синтез нуклеотида de novo очень энергоемкий, растения способны рециркулировать нуклеозиды по пути спасения (Zrenner et al., 2006). В этом случае поставляемые извне нуклеозиды могут быть импортированы с помощью уравнительного переносчика нуклеозидов 3 (ENT3) для фосфорилирования до нуклеотидов (Traub et al., 2007). Добавление 1/2 чашек с агаром MS с 1 мМ цитидином для другого анализа сегрегации снова дает 10% непроращенных семян обеих линий + / ctps2 , тогда как семена WT росли нормально (Фигуры 1B, C).Это открытие предполагает, что критическая роль CTPS2 имеет место в производстве семян, а не в прорастании.

Для детального исследования развития семян семена WT и + / ctps2-1 высевали в почву и отдельные растения разделяли в отдельные горшки. Гетерозиготная вставка Т-ДНК в + / ctps2-1 была подтверждена с помощью ПЦР с комбинациями ген-специфичных и Т-ДНК-специфичных праймеров, как указано в Daumann et al.(2018). После того, как растения начали репродуктивный рост, через 8 дней после оплодотворения (DAF) собирали стручки WT и + / ctps2-1 . Силосы WT содержали здоровые семена с зародышем темно-зеленого цвета внутри, тогда как стручки + / ctps2-1 показали под здоровыми семенами прозрачные, а также разрушенные семена коричневого цвета (рис. 2А). Чтобы проверить, может ли добавка пиримидинов спасти фенотип, соцветия трех растений + / ctps2-1 были удалены, за исключением одного соцветия с закрытыми бутонами.Эти растения орошали водой, содержащей 10 мМ цитидина, до тех пор, пока силикат не достигал 8 DAF. Тем не менее, свободные от зародыша и разрушенные семена все еще наблюдались (рис. 2А), что указывает на то, что цитидин не переносился в эмбрион или что эмбрион не может перерабатывать это соединение. Мы предположили, что абортированные семена гомозиготны по вставке Т-ДНК, и начали подсчет семян от + / ctps2 растений. В обеих линиях были обнаружены семена, которые были полностью сморщены или имели почти нормальный размер, но были плоскими (рис. 2В).Оба типа считались абортированными семенами. Из общего числа 2125 семян в WT 0,4% были абортированы, тогда как + / ctps2-1 содержали 22,3% и + / ctps2-2 21,9% абортированных семян в 2142 и 2475 семенах, соответственно (Рисунок 2C). Таким образом, при подсчете абортированных семян в стручках от потомства + / ctps2 были обнаружены почти ожидаемые 25% гомозиготных = нежизнеспособных семян. Причина, по которой это не отражается в нашем анализе всхожести, заключается в том, что многие сорванные и разрушенные семена теряются или не учитываются во время сбора урожая, очистки семян или посева.

Рисунок 2. Идентификация гомозиготных семян ctps2 . Siliques вскрывали через 8–10 дней после оплодотворения (DAF) от растений дикого типа (WT) и + / ctps2-1 растений. (A) Орошение растений + / ctps2-1 10 мМ цитидином не может спасти фенотип абортированных семян. Двенадцать силиков DAF собирали и сушили при комнатной температуре, а семена собирали с помощью световой микроскопии. (B) красные стрелки указывают на свернувшиеся семена, а золотые стрелки указывают на бесцветные семена почти нормального размера, предположительно содержащие зародыши, задержанные в раннем развитии.Подсчет семян для WT, + / ctps2 и дополнительных + / ctps2 растений. Шкала = 0,25 мм для (A) и 1 мм для (B) . n = 3 для WT и + ctps2-1 , всего 38 и 40 силикатов соответственно; n = 4 для + / ctps2-1 :: CTPS2 и + / ctps2-2 :: CTPS2, всего 38 и 36 кремний соответственно; n = 5 для + / ctps2-2 с 52 силикатами в (C) .

Рисунок 3. Флуоресцентная визуализация линий CTPS2 :: GFP в эмбриональных клетках. Стволы выращенных в почве растений (линии CTPS2 :: GFP # 10 и # 15) открывали через 2 дня после внесения удобрений (DAF) и между 6 и 8 DAF, и собирали семена. Семяпочки и зародыши выделяли из семян для конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. Показаны типичные изображения. Масштабная линейка = 100 мкм.

Рис. 4. Основные характеристики флуоресцентной визуализации CTPS2 :: GFP. Эмбрионы выделяли из кремнеземов через 8 дней после оплодотворения (DAF) для конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.Для этого были использованы строки CTPS2 :: GFP # 10 и # 15 и выбраны типовые изображения. Масштабная линейка = 10 мкм в (A) и 100 мкм в (B) . Максимальное проецирование 24 изображений в (B) .

Рис. 5. Флуоресцентная визуализация линий CTPS2 :: GFP в молодых корнях проростков. Проростки выращивали на чашках с агаром 1/2 Murashige – Skoog (MS) и в указанные моменты времени переносили на предметные стекла с пропидий йодидом, содержащим воду, для окрашивания клеточной стенки и последующей конфокальной лазерной сканирующей микроскопии с микроскопом Leica TCS SP5II.CTPS2 :: GFP строки # 10 и # 15 были использованы. Показаны типичные изображения. Масштабная линейка = 25 мкм. DAG, дни после прорастания.

Рис. 6. Флуоресцентная визуализация линий CTPS2 :: GFP в корнях проростков. Условия роста и микроскопии, как на рисунке 5. Масштабная линейка = 25 мкм. DAG, дни после прорастания.

Интеграция полной белковой кодирующей последовательности CTPS2 под контролем полного эндогенного промотора (1,864 п.н. выше ATG) в растения + / ctps2 привела в среднем только к 5% абортированных семян в обеих линиях, демонстрируя, что фенотип по крайней мере частично дополнен (рис. 2C).Мы также стремились спасти фенотип семян + / ctps2 путем экспрессии изоформ CTPS1-4, управляемых промотором UBQ в виде конструкций слияния YFP (уже в наших руках, описанных в Daumann et al., 2018). Для этого трансформировали растения + / ctps2 , положительные трансформанты проверяли на устойчивость к канамицину и проверяли с помощью ПЦР. Три растения на трансформированную конструкцию и 4–10 стручков от соответствующих растений проверяли на наличие WT-подобных семян, но ни в одном случае комплементация не была успешной.Кроме того, ПЦР-проверка трансформированного потомства этих трансформантов ни в коем случае не выявила гомозиготной вставки Т-ДНК. Таким образом, CTPS2, управляемый эндогенным промотором, по-видимому, имеет решающее значение для правильного развития эмбриона.

CTPS2 :: Линии GFP / GUS выявляют тканеспецифичные

Для визуализации активности промотора CTPS2 использовали 1002 п.н. перед стартовым кодоном. Эту нуклеотидную последовательность клонировали в pBGWFS7.0 (Karimi et al., 2002) и посредством этого трансляционно слит с меткой eGFP и β-глюкуронидазы (GUS). Идентифицировали пять положительных трансформантов, и геномную интеграцию конструкции подтвердили с помощью ПЦР. Аналогичная картина окрашивания GUS наблюдалась во всех пяти линиях, и для дальнейшего анализа были выбраны линии CTPS2 :: GFP / GUS # 10 и # 15.

Гистохимическое окрашивание линий CTPS2 :: GUS выявило экспрессию в корнях, листьях и цветках растений Arabidopsis на протяжении всего развития (дополнительный рисунок 1).Пятидневные проростки показали окрашивание GUS в корне (особенно в кончиках первичных и вторичных корней), апикальной меристеме побега, ткани сосудистой сети листьев и нитях цветков (дополнительный рисунок 1).

Оплодотворенные семяпочки примерно при 1,5 DAF показали сильные сигналы CTPS2 :: GFP в периферическом и халазальном эндосперме, но с самым сильным сигналом флуоресценции в периферическом эндосперме (Рисунок 3). Эмбрион Arabidopsis развивается до 6 DAF стадии сердца, а затем быстро развивается до зрелого эмбриона до 8 DAF (Feng and Ma, 2017).Повышенная экспрессия наблюдалась от глобулярных до сердечных эмбрионов в обзоре экспрессии в целом по геному (Winter et al., 2007). В этом исследовании максимальная экспрессия во всех тканях Arabidopsis наблюдалась на стадии свернутой семядоли. Мы проследили экспрессию CTPS2 во время быстрого развития до стадии зрелого эмбриона. На ранней стадии сердца мы наблюдали точечный рисунок флуоресценции, преимущественно в клетках колумеллы эмбрионов. Даже на виде сбоку, повернутом на 90 °, эмбрион на поздней стадии сердца показал тот же паттерн экспрессии, но сигнал флуоресценции был специфически локализован только на двух или четырех клетках кончика корня (рис. 3).Когда эмбрион развивается до стадии изогнутой семядоли, сигнал флуоресценции в этих клетках колумеллы остается сильным. Когда эмбрион достигает зрелой стадии, флуоресценция CTPS2 :: GFP наблюдалась и в других тканях, кроме колумеллы. При этом промоторная активность наблюдалась в обеих семядолях (фиг. 3). Удивительно, но сильный сигнал флуоресценции в клетках эмбриона колумеллы, по-видимому, возникает только в двух клетках, где раньше была связь между эмбрионом и клетками суспензора (рис. 4А).Ранний зародыш, а также клетки эндосперма связаны с материнской тканью через суспензор, чтобы обеспечить поступление питательных веществ и фитогормонов материнским растением (Bozhkov et al., 2005; Robert et al., 2018). Более того, максимальная проекция зрелого эмбриона выявила сильную флуоресценцию CTPS2 :: GFP в клетках эпидермиса корня, а также в семядолях (Рисунок 4B). Особенно в клетках эпидермиса корня стало очевидно, что сигнал флуоресценции не распределялся однородно, но, по-видимому, присутствовал в более поздних клетках атрихобластов или трихобластов (рис. 4В).Эти находки позволяют предположить, что CTPS2 пространственно-временно экспрессируется в клетках колумеллы развивающегося эмбриона. После 7 DAF экспрессия распространяется на другие ткани корня и семядолей.

CTPS2 :: Флуоресценция GFP в корнях проростков ограничена клетками колумеллы и трихобластами

Из-за нерегулярного характера экспрессии CTPS2 в эмбрионе корни молодых проросших проростков были изучены более подробно. Через день после прорастания сигнал флуоресценции CTPS2 :: GFP был очень сильным в клетках кончика корня (рис. 5).В отличие от изображений, полученных нами у развивающихся эмбрионов, корни окрашивали интеркалирующим красителем пропидиум йодидом. Таким образом, мы обнаружили, что флуоресценция CTPS2 :: GFP была ограничена двумя центральными клетками на кончике корня (рис. 5). Хотя интенсивность сигнала флуоресценции в центральных клетках кончика корня со временем снижалась, он полностью отсутствовал в клетках этого типа через 5 дней после прорастания (рис. 5). Когда проросток становится 5 дней и старше, сигнал флуоресценции смещается в сторону удлинения, а затем в сторону зоны дифференцировки (рисунки 5, 6).В зоне дифференцировки активность промотора CTPS2 была обнаружена только в молодых и развивающихся корневых волосковых клетках (трихобластах) (рисунок 6 и дополнительный рисунок 2), что снова указывает на сильную пространственно-временную экспрессию CTPS2 (рисунок 6 и дополнительный рисунок). 2). Наблюдая за отростком первичного корня, сигналы флуоресценции были ограничены файлами клеток трихобласта, которые всегда разделены по крайней мере одним файлом клеток атрихобласта (дополнительный рисунок 4B). Интересно, что мы обнаружили сильную экспрессию CTPS2 снова в клетках кончика корня боковых корней, подчеркивая наблюдаемую сильную пространственно-временную экспрессию (Рисунок 6 и дополнительный рисунок 2).

Обработка ауксином увеличивает CTPS2 :: GFP флуоресценцию

Поскольку активность промотора CTPS2 в клетках колумеллы выявила аналогичный сигнал флуоресценции по сравнению с установленным репортером ауксина DR5 :: GFP, мы выровняли нуклеотидную последовательность элемента ответа на ауксин (TGTCTC) с последовательностью промотора CTPS2 , использованной в данное исследование (Ulmasov et al., 1995, 1997; Feng, Ma, 2017). В рамках выравнивания мы обнаружили повтор элемента ответа на ауксин (AuxRE) в промоторе CTPS2 в положении 652–665 перед экзоном 1, прерванный двумя основаниями CG (дополнительный рисунок 3).Это открытие указывает на то, что CTPS2 может регулироваться ауксином. Для подтверждения этого открытия две репортерные линии CTPS2 # 10 и # 15 выращивали на чашках с агаром 1/2 MS в течение 7 дней и переносили на чашки с агаром 1/2 MS с добавлением 250 нМ 1-NAA или 250 нМ ДМСО. После 20-часового роста конфокальная лазерная сканирующая микроскопия с последующим анализом интенсивности флуоресценции с использованием ImageJ (версия 1.51j8) выявила действительно более высокую интенсивность сигнала GFP в отдельных трихобластах растений, обработанных NAA (дополнительный рисунок 4).В контрольных условиях среднее значение серого на клетку линий №10 и №15 составляло 184,7 и 159,4 соответственно. Обработка NAA значительно увеличила среднее значение серого на клетку в обеих линиях, что привело к 216,8 для линии № 10 и 220,8 для линии № 15 (фиг. 7). Примечательно, что увеличение интенсивности флуоресценции было наиболее заметно в клетках трихобластов обеих линий; Обработка NAA дополнительно индуцировала флуоресценцию в клетках коры корня и частично в атрихобластах (дополнительный рисунок 4). Однако не было обнаружено значительного повышения интенсивности клеточной флуоресценции для клеток коры корня (данные не показаны).

Рис. 7. Количественная оценка интенсивности флуоресценции CTPS2 :: GFP в трихобластах после нанесения 1-нафталинуксусной кислоты (NAA). Пятидневные проростки, выращенные на чашках с агаром 1/2 Murashige-Skoog (MS), переносили на 250 нМ NAA или контрольные чашки [диметилсульфоксид (DMSO)] на 20 часов. Интенсивность флуоресценции корней от пяти проростков на обработку 20 клетками на анализируемый корень представлена ​​в виде прямоугольных диаграмм. Белые и серые прямоугольники представляют собой среднее значение для растений, обработанных ДМСО и NAA, соответственно.Медиана показана белой или черной линией на прямоугольной диаграмме DMSO или NAA, соответственно. Звездочки указывают на статистически разные данные (тест Стьюдента t , p <0,05).

Обсуждение

Во время развития растений особенно молодым тканям требуется огромное количество нуклеотидов для деления и роста клеток, например, для синтеза рибосом. Таким образом, предполагается, что скорость синтеза de novo в проростках и растущих тканях обычно высока (Zrenner et al., 2006). Эта гипотеза была подтверждена обнаружением сильной экспрессии аспартат-транскарбамоилазы, фермента, который совершает лимитирующую стадию в синтезе пиримидина de novo в Arabidopsis (Bassett et al., 2003; Chen and Slocum, 2008). Снижение синтеза нуклеотида de novo , вызванное более низкой экспрессией UMP-синтазы, увеличивает активность пиримидина в спасении растущих клубней картофеля (Geigenberger et al., 2005). Напротив, дифференцированные клетки поддерживают свои пулы нуклеотидов за счет спасения и компенсируют катаболические процессы за счет незначительной активности синтеза de novo (Zrenner et al., 2006). Следовательно, поставляемый извне нуклеозид цитидин, который может быть импортирован в растения с помощью ENT3 (Traub et al., 2007) и может фосфорилироваться до CMP с помощью уридин / цитидинкиназы (Ohler et al., 2019), должен обеспечивать компенсацию потери активности CTP-синтазы в ctps2 проростках. Однако применение 1 мМ цитидина не преодолело фенотип прорастания семян ctps2 (рис. 1). Наряду с обнаружением того факта, что стручки растений + / ctps2 содержат почти 25% абортированных семян, которые также нельзя восстановить путем орошения 10 мМ цитидинсодержащей водой, а путем дополнения + / ctps2 растений CTPS2 под контролем эндогенного промотора, мы заключаем, что решающая функция CTPS2 лежит в развитии эмбриона (Рисунок 2).Транспортировка цитидина к эмбриону, соответствующая деятельность по спасению или способность импортировать, по-видимому, недостаточны для спасения развития эмбриона.

Из работы с D. melanogaster известно, что развитие яйцевой камеры сопровождается высокой потребностью в нуклеотидах и накоплением CTP-синтазы, чтобы обеспечить повышенный синтез рибосомной РНК (рРНК) (Aughey et al., 2016). Неожиданно флуоресценция CTPS2 :: GFP была ограничена кончиком клеток колумеллы в эмбрионах сердца и на более поздних стадиях.Во время развития эмбриона флуоресценция CTPS2 :: GFP наблюдалась в других эмбриональных тканях после 7 DAF (Фигуры 3, 4). В отличие от этого, мы заметили относительно сильную флуоресценцию в периферическом эндосперме яйцеклеток 1,5 DAF (рис. 3, верхняя панель). Наряду с обнаружением разрушенных и свободных от зародышей семян в 8–10 DAF стручках растений + / ctps2-1 , вероятно, что нокаут CTPS2 вызывает остановку эмбрионального роста на раннем этапе развития эмбриона. Андриотис и Смит (2019) обнаружили, что нарушение синтеза пуринов вызывает остановку роста и прерывание эмбриона на глобулярной стадии.Это также было обнаружено для генов окислительного пентозофосфатного пути, обеспечивающих предшественники фосфорибозилпирофосфатного синтеза (косубстрат в синтезе нуклеотида de novo ) и синтазы UMP. Таким образом, мы предполагаем, что CTPS2 является геном EMB , что соответствует результатам Meinke (2020), вызывая задержку роста на раннем этапе развития эмбриона. Более того, нокаут ферментов в синтезе пиримидина de novo , который кодируется одним геном, приводит к летальному исходу для эмбриона (Schröder et al., 2005; Чен и Слокум, 2008). Поскольку Arabidopsis обладает пятью генами CTP-синтазы, их пространственно-временная регуляция вероятна и может объяснить, почему нокауты CTPS2 не могут быть дополнены другими изоформами CTP-синтазы. Конечно, можно утверждать, что сильные промоторы в качестве промотора UBQ, используемые в нашем подходе, приводящие к относительно высокой экспрессии трансгенов, должны позволять дополнять отсутствующую экспрессию. Однако вполне может быть, что в этом случае требуется профиль экспрессии или реакция на ауксин.Мы также не можем исключить, что более интенсивный поиск дополняющих строк увенчается успехом. Тем не менее, никакая другая Arabidopsis CTP-синтаза не содержит повторения AuxRE в своем промоторе, за исключением CTPS2 . Однако почему экспрессия CTPS2 ограничена клетками кончика колумеллы в развивающемся эмбрионе? Stadler et al. (2005) установили мобильный и связанный с мембраной подход GFP под контролем At промотора SUC3, который позволяет отслеживать перемещение от клетки к клетке. At активность промотора SUC3 была описана в нескольких тканях стока, а также в суспензоре (Meyer et al., 2004). Тем не менее, Stadler et al. (2005) наблюдали сигналы флуоресценции GFP у эмбрионов на глобулярной стадии, сделав вывод, что суспензор и ранний эмбрион строят симпластическую систему. После разъединения суспензора и эмбриона (Bozhkov et al., 2005) и прогрессирования в развитии эмбриона флуоресценция GFP становится все более и более ограниченной отдельными типами клеток, например, клетками эпидермиса (Stadler et al., 2005). Это означает, что симпластическое движение макромолекул больше не облегчается у более старых эмбрионов, но тканеспецифическая связь с помощью плазмодесм все еще должна сохраняться (Stadler et al., 2005). Считается, что молекулы с массой до 800 Да могут свободно диффундировать посредством симпластического транспорта (Lalonde et al., 2004; Karmann et al., 2018). Поскольку CTP имеет массу 483 Да, можно предположить, что CTPS2 продуцирует CTP в эмбриональных клетках колумеллы, который затем симпластически распределяется между всеми эмбриональными клетками.Уменьшение количества плазмодесм во время дальнейшего развития запускает активность CTPS2 в других типах клеток, что приводит к флуоресценции GFP в клетках эпидермиса и семядолях (рис. 4B).

Паттерн экспрессии CTPS2 был подобен таковому у репортера ауксина DR5 :: GFP (Feng and Ma, 2017) во время эмбриогенеза, а повтор AuxRE был локализован в области промотора CTPS2 (дополнительный рисунок 4). Материнские ткани снабжают эмбрион ауксином до глобулярной стадии, когда эмбрион способен сам производить ауксин (Robert et al., 2018). При оплодотворении яйцеклетки суспензионные клетки экспрессируют PIN7 для направленного транспорта ауксина к эмбриону, и концентрация ауксина высока на базальном конце эмбриона (Friml et al., 2003). Когда эмбрион начинает независимую продукцию ауксина в своих апикальных клетках, активируется экспрессия PIN1, в результате чего возникает апикально-базальный градиент ауксина, накапливающий ауксин в базальном конце эмбриона и в верхних клетках суспензора (Friml et al., 2003; Vieten et al. др., 2005; Роберт и др., 2013, 2018).Рост — это время высокой потребности в нуклеотидах; таким образом, очевидно, имеет смысл связывание экспрессии CTPS с ауксином гормона роста. Симпластическое соединение эмбриональных клеток могло бы позволить распределение нуклеотидов (CTP) внутри эмбриона. В то же время такая система, возможно, позволила бы лучше регулировать по сравнению со спасением цитидина, полученного из флоэмы, чего, согласно нашим результатам, не происходит.

В корне DR5 :: GFP экспрессируется в первичном и боковом кончиках корня, особенно в клетках колумеллы, аналогично наблюдениям, сделанным в этом исследовании [Рисунки 5, 6 (Wabnik et al., 2011; Raya-González et al., 2018]. DR5 :: GFP и DR5 :: GUS представляют собой ауксин-чувствительные системы промотор-репортер, использующие повторы последовательности длиной 11 п.н., содержащей последовательность TGTCTC в синтетическом промоторе DR5 (Ulmasov et al., 1997; Ottenschläger et al., 2003) . Следовательно, очевидно, что сигналы флуоресценции GFP, наблюдаемые под контролем промотора CTPS2 , не так интенсивны, как сигналы DR5 :: GFP, но могут быть усилены применением ауксина (рисунок 7 и дополнительный рисунок 4). Однако колумелла — очень динамичная ткань, которая, вероятно, требует большого количества CTP.Помимо использования в качестве строительного блока для РНК и ДНК в дрожжах, CTP является важным предшественником в биосинтезе мембранных фосфолипидов. Хотя CTP ингибирует активность фермента CTPS, у дрожжей было показано, что фосфорилирование CTPS стимулирует его активность и увеличивает эндогенные концентрации CTP (Chang and Carman, 2008). Поскольку механизмы посттранскрипционной регуляции и биохимические свойства растительных CTPS еще полностью не изучены (Daumann et al., 2018), возможно, что CTPS из Arabidopsis могут регулироваться аналогично дрожжевым CTPS.

Уже в зрелых эмбрионах наблюдали паттерн экспрессии CTPS2 , выстилающий продольные ряды клеток, напоминающий паттерн трихобласт / атрихобласт в корнях развивающихся растений (фиг. 4B). Более того, образование корневых волосков инициируется ауксином, и мы фактически наблюдали экспрессию CTPS2 в клетках корневых волосков. Фитогормон стимулирует AuxRE и тем самым индуцирует специфические для трихобластов киназы, которые инициируют удлинение трихобластов (Vissenberg et al., 2020). Основным компонентом мембран растений является фосфатидилхолин, и для его синтеза de novo требуется холин CDP, доставляемый по пути Кеннеди.Одним из начальных шагов является перенос цитидильной части от CTP к фосфохолину (Kennedy, 1958; Caldo et al., 2019). Переход от клетки трихобласта к корневому волоску, который в конечном итоге остается одной клеткой, требует огромных количеств мембранных фосфолипидов и, следовательно, CTP (Kinney, 1993). Наряду с нашим обнаружением высокой активности промотора CTPS2 в трихобластах (рисунок 6 и дополнительный рисунок 2), было обнаружено, что транскрипт CTPS2 активируется в анализе РНК-seq на клетках корневых волосков Arabidopsis (Huang et al., 2017).

В совокупности мы заключаем из наших данных, что CTPS2 необходим для развития эмбриона. Мы предполагаем, что ауксин может действовать на регуляцию транскрипции CTPS2 в корнях зародыша и проростков и, таким образом, влиять на их развитие.

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направить соответствующему автору.

Авторские взносы

DH генерировал линии комплементационных и промотор-репортерных генов и анализировал развитие и прорастание семян.DH и DS выполняли конфокальную микроскопию. Д.С. посоветовал провести эксперименты по лечению ауксином и количественную оценку интенсивности флуоресценции, проводимую DH. Все авторы внесли свой вклад в дизайн исследования и написали рукопись.

Финансирование

Это исследование было поддержано DFG-Grant MO 1032 / 5-1 TM и финансированием исследовательской инициативы BioComp от земли Рейнланд-Пфальц (Германия) DS и TM.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2021.652434/full#supplementary-material

Список литературы

Андриотис В. М., Смит А. М. (2019). Пентозофосфатный путь пластид необходим для постглобулярного развития эмбрионов Arabidopsis . Proc. Natl. Акад. Sci.U.S.A. 116, 15297–15306. DOI: 10.1073 / pnas.1

6116

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Барри, Р.М., Битбол, А. Ф., Лорестани, А., Чарльз, Э. Дж., Хабриан, К. Х., Хансен, Дж. М. и др. (2014). Крупномасштабное образование филаментов подавляет активность CTP-синтетазы. Элиф 3: e03638.

Google Scholar

Бассет, Э. В., Буше, Б. Ю., Карр, Дж. М., Уильямсон, К. Л., и Слокум, Р. Д. (2003). PALA-опосредованное пиримидиновое голодание увеличивает экспрессию аспартат-транскарбамоилазы (pyrB) в проростках Arabidopsis . Plant Physiol. Biochem. 41, 695–703.DOI: 10.1016 / s0981-9428 (03) 00094-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Божков, П. В., Филонова, Л. Х., Суарес, М. Ф. (2005). Запрограммированная гибель клеток в эмбриогенезе растений. Curr. Вершина. Развивать. Биол. 67, 135–179. DOI: 10.1016 / s0070-2153 (05) 67004-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кальдо, К. М. П., Сюй, Ю., Фаларз, Л., Джаявардхане, К., Аседо, Дж. З., и Чен, Г. (2019). Arabidopsis CTP: фосфохолинцитидилилтрансфераза 1 фосфорилируется и ингибируется неферментирующей сахарозой 1-родственной протеинкиназой 1 (SnRK1). J. Biol. Chem. 294, 15862–15874. DOI: 10.1074 / jbc.ra119.008047

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чанг, Ю. Ф., и Карман, Г. М. (2008). CTP-синтетаза и ее роль в синтезе фосфолипидов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Prog. Губа. Res. 47, 333–339. DOI: 10.1016 / j.plipres.2008.03.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чен, К. Т., и Слокум, Р. Д. (2008). Экспрессия и функциональный анализ аспартат-транскарбамоилазы и роль синтеза пиримидина de novo в регуляции роста и развития у Arabidopsis . Plant Physiol. Biochem. 46, 150–159. DOI: 10.1016 / j.plaphy.2007.10.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Curtis, M. D., and Grossniklaus, U. (2003). Набор векторных клонирующих векторов для высокопроизводительного функционального анализа генов плантаций. Plant Physiol. 133, 462–469. DOI: 10.1104 / стр.103.027979

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дауман, М., Хикл, Д., Циммер, Д., ДеТар, Р.А., Кунц, Х. Х., Мёльманн, Т. (2018). Характеристика филамент-образующих CTP-синтаз из Arabidopsis thaliana . Плант Дж. 96, 316–328. DOI: 10.1111 / tpj.14032

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фэн Дж. И Ма Л. (2017). Метод характеристики эмбриогенеза Arabidopsis . JoVE (J. Visualized Exp.) 126: e55969.

Google Scholar

Фримл, Дж., Виетен, А., Зауэр, М., Weijers, D., Schwarz, H., Hamann, T., et al. (2003). Зависящие от оттока градиенты ауксина устанавливают апикально-базальную ось Arabidopsis . Природа 426, 147–153. DOI: 10.1038 / nature02085

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гайгенбергер П., Регирер Б., Нунес-Неси А., Лейсс А., Урбанчик-Вочняк Э., Спрингер Ф. и др. (2005). Ингибирование синтеза пиримидина de novo в растущих клубнях картофеля приводит к компенсаторной стимуляции пути утилизации пиримидина и последующему повышению биосинтетических свойств. Растительная клетка 17, 2077–2088. DOI: 10.1105 / tpc.105.033548

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hruz, T., Laule, O., Szabo, G., Wessendorp, F., Bleuler, S., Oertle, L., et al. (2008). Genevestigator v3: эталонная база данных экспрессии для метаанализа транскриптомов. Adv. Bioinf. 2008: 420747.

Google Scholar

Хуанг, Л., Ши, X., Ван, В., Рю, К. Х., и Шифельбейн, Дж. (2017). Диверсификация генов развития корневых волосков у сосудистых растений. Plant Physiol. 174, 1697–1712. DOI: 10.1104 / стр.17.00374

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кайзер, С., Эйса, А., Кляйне-Вен, Дж., И Шойринг, Д. (2019). NET4 модулирует компактность вакуолей в Arabidopsis thaliana . Внутр. J. Mol. Sci. 20: 4752. DOI: 10.3390 / ijms20194752

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Карими М., Инзе Д. и Депикер А. (2002). GATEWAY ^TM векторы для опосредованной Agrobacterium трансформации растений. Trends Plant Sci. 7, 193–195. DOI: 10.1016 / s1360-1385 (02) 02251-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Карманн Дж., Мюллер Б. и Хаммес У. З. (2018). Долгий и извилистый путь: пути переноса аминокислот в семенах Arabidopsis . Завод Репро. 31, 253–261. DOI: 10.1007 / s00497-018-0334-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кеннеди, Э. П. (1958). Биосинтез фосфолипидов. Am. J. Clinic. Орех. 6, 216–220.

Google Scholar

Кинни, А. Дж. (1993). «Липидный обмен» в растениях. Головные группы фосфолипидов , изд. Т. С. Мур (Бока-Ратон: CRC Press).

Google Scholar