Оформите полис онлайн и получите скидку 20% при оплате картой «Мир»
Городские огни
Какой теплотой, уверенностью, спокойствием озаряет нас свет родных окон. Когда среди сотен вечерних огней удается найти свой маячок, мы знаем – нас ждут, нас любят. И главная задача АО «МАКС» сохранить Ваше спокойствие.
Страхование путешественников
ВЗР — надежная и доступная страховка для выезжающих за рубеж.
МАКС-ТЕЛЕМЕД
Нужна консультация врача, но нет времени приехать в клинику? Вам поможет программа страхования «МАКС-ТЕЛЕМЕД»!
На старт!
Страховая группа «МАКС» предлагает специальную программу страхования спортсменов «На старт!».
PROспорт
Программа страхования участников спортивных мероприятий от несчастных случаев
Детский лагерь
Страхование детей от несчастных случаев на период отдыха в лагере.
Рейтинг «Эксперт РА» «ruА+»
Филиалы и представительства во всех регионах Российской Федерации.
СК «МАКС» создана 13 марта 1992 года.
Под нашей страховой защитой более 24 млн граждан и 100 тыс. предприятий.
Страховая компания «МАКС» создана в 1992 году и осуществляет деятельность по всем основным видам добровольного и обязательного страхования. В число основных партнеров компании «МАКС» на финансовом рынке входят банки высшей категории надежности, имеющие рейтинги международных рейтинговых агентств.
Электронный полис ОСАГО МАКС 2021 / Миавто.ру
Начиная с 2017 года, каждый автовладелец может без всяких трудностей оформить и купить страховой полис ОСАГО. То есть, страховая компания обязана создать все условия для комфортного автострахования. Но порою у некоторых страховщиков такая возможность существует только формально. Как же все-таки сделать полис, избегая очередей, ненужных бумаг и навязывания услуг? Все просто: оформите электронный полис ОСАГО от привлекательного для вас страховщика в Миавто, и вам не придется впустую тратить время.
Электронные полисы Макс избавят от проблем
Миавто предлагает вам, в числе прочих, воспользоваться услугами страховой компании МАКС. Она ведет свою работу с 1993 года, а в 2003 году получила право заниматься автострахованием. Вы можете оформить и купить электронный страховой полис ОСАГО МАКС онлайн 2021 на сайте Миавто. А доставку электронного полиса МАКС мы обеспечим вам бесплатно и в круглосуточном режиме. То есть, вы получите готовый документ на ваш e-mail, распечатаете на любом принтере — и можно ездить. Если принтера в свободном доступе у вас нет, документ можем распечатать и мы.
Для покупки ОСАГО МАКС ОНЛАЙН вам нужно на нашем портале заполнить строки необходимыми данными из следующих документов:
Всю необходимую информацию мы формируем в анкету, на основе которой делается заявка. После оплаты мы сразу отошлем на вашу почту уже оформленный бланк ОСАГО. Если вдруг вы засомневались в его юридической силе, вы всегда можете проверить подлинность вашего полиса ОСАГО, а также скидку на него через официальный сайт РСА.
Другие услуги на сайте Миавто
На сайтах многих страховщиков возникают определенные проблемы с приобретением электронного полиса ОСАГО. Сбои в программе — не редкость в использовании онлайн услуг. Мы уверяем вас, что на портале Миавто такого точно не произойдет, а если у вас возникли какие-либо вопросы, мы всегда на связи и оперативно вам поможем. Вы не только сэкономите время, но и получите качественно оказанные услуги.
На нашем сайте, помимо покупки страхового полиса ОСАГО ON-LINE, вы можете также приобрести КАСКО, ДСАГО и ГО и оформить диагностическую карту техосмотра 2021. А бесплатный ON-LINE калькулятор ОСАГО и КАСКО всего в пару кликов поможет вам рассчитать стоимость страховки от всех компаний сразу.
Миавто – индивидуальный подход к каждому клиенту
Также у нас вы сможете приобрести комплекс услуг, специально подобранный для удобства наших клиентов:
Оформление ОСАГО+ТО мы сделали в круглосуточном режиме, чтобы даже самые занятые клиенты смогли воспользоваться нашими услугами. Мы сотрудничаем только с самыми надежными и проверенными годами страховщиками, и вы можете выбрать любого из них: РОСГОССТРАХ, РЕСО, УРАЛСИБ, Согласие, Ренессанс, Ингосстрах, Альфастрахование, ВТБ, МАКС, ВСК, СОГАЗ. Обращайтесь в Миавто, и вы навсегда забудете о проблемах, которые часто ассоциируют с автострахованием. Мы всегда будем рады видеть вас!
Ошибка вышла: страховая оставит без полиса и не вернет деньги | Статьи
Из-за ошибок при оформлении ОСАГО в режиме онлайн автомобилисты могут остаться без полиса и потраченных на него денег. Страховщики предупредили: если клиенты спутают категорию своей машины, ошибутся в мощности двигателя, договор можно правомерно аннулировать, а премию не возвращать. Каких ошибок нельзя допускать и как автовладельцам доказать, что они не мошенники, разбирались «Известия».
Проверять стали тщательнее
Оказалось, что не все знают о ловушке при оформлении страховки в режиме онлайн — если в данные даже случайно закрадется ошибка, страховая компания оформит полис, а вот когда неточность вскроется, расторгнет договор в одностороннем порядке.
«В таких случаях расторжение страховщиком полиса является правомерным. При этом уплаченная страховая премия возврату не подлежит в соответствии с правилами ОСАГО», — объяснили «Известиям» в Центробанке. Одновременно регулятор подтвердил и наличие жалоб на односторонние расторжения полисов ОСАГО с удержанием уплаченных средств. При этом в пресс-службе Центробанка отметили, что отдельной статистики по таким обращениям не ведут.
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Алексей Майшев
«В период с декабря 2020 по февраль 2021 года в Банк России поступило несколько десятков обращений от заявителей из различных регионов, часть которых может быть связана с расторжением договоров ОСАГО в связи с намеренным представлением страхователями ложных сведений для уменьшения размера страховой премии», — сообщили в Центробанке.
В ЦБ объяснили, что недобросовестные страхователи могут указывать недостоверные сведения в отношении мощности транспортного средства, а также целей его использования.
«Вместе с тем в ходе рассмотрения обращений выявляются факты неправомерного расторжения договоров ОСАГО в одностороннем порядке. В этих случаях со страховщиками проводится надзорная работа с помощью различных инструментов поведенческого надзора по устранению нарушений и недопущению их в последующем», — уточнили в Центробанке.
Что говорят страховщики
В ПАО СК «Росгосстрах» рассказали «Известиям», что механизм расторжения договоров страхования автогражданской ответственности за предоставление ложных сведений работает уже очень давно. Перерыв на пару месяцев был сделан только на период перехода на АИС ОСАГО 2.0.
Проверку проходят все полисы: указанные клиентом данные сверяют с теми, которые содержатся в государственных базах данных.
Фото: ТАСС/Донат Сорокин
«К сожалению, пока не налажен прямой информационный обмен между страховщиками и органами исполнительной власти. Поэтому нельзя делать проверку в течение того времени, пока оформляется договор. Приходится делать проверки уже постфактум», — посетовал директор департамента моделирования и анализа ПАО СК «Росгосстрах» Алексей Володяев.
По словам представителя «Росгосстраха», чаще всего причиной для расторжения договоров становятся неверные сведения о цели использования автомобиля.
«Например, страхователи «случайно» забывают про оформленную накануне лицензию такси. Или неверно указана категория ТС — не все автолюбители помнят, что некоторые внедорожники входят в категорию C, а микроавтобусы с числом сидячих мест свыше восьми — в категорию D, не говоря уже о том, что иногда в категорию А пытаются отнести популярные кроссоверы. Бывают ошибки и в указании мощности двигателя — в том числе и ее сознательное занижение», — поделился примерами Володяев.
В «Росгосстрахе» также рассказали, что расторгают договоры тогда, когда «очевидно идет речь о сознательном и преднамеренном искажении предоставляемых данных, либо в случае серьезных ошибок — например, если мощность двигателя занижена сразу на несколько лошадиных сил». На таких основаниях компания расторгает не более 1,5% договоров ОСАГО. При этом восстанавливается из-за ошибочного расторжения примерно 0,03%.
Фото: ТАСС/Донат Сорокин
Иногда водители редких или модифицированных автомобилей не имеют возможности выбрать на сайте подходящие параметры, в том числе и по мощности двигателей своих транспортных средств. И тут снова есть риск попасться в ловушку. В случае если параметры автомобиля не соответствуют данным, которые предлагает калькулятор ОСАГО, в «Росгосстрахе» советуют выбрать опцию «Другое ТС» и ввести все данные вручную либо обратиться в офис или к агенту страховщика.
Практика тотальных проверок
В «Страховом доме ВСК» система выборочной проверки полисов ОСАГО на соответствие информации, указанной в полисе/заявлении о страховании, работает с 2020 года.
«Частота расторжений договоров носит единичный характер. Такие случаи связаны в основном с искажениями в указанной категории/типе транспортного средства, а также с занижением мощности, информации о территории преимущественного использования, — рассказал представитель страховой компании. — Чтобы избежать расторжения договора, необходимо тщательно заполнять документы, а при использовании услуг посредника — внимательно относиться к его выбору».
В «АльфаСтраховании» сообщили, что из-за ложных сведений в среднем в месяц расторгается всего 1–2% от общего числа заключаемых договоров е-ОСАГО.
Фото: ТАСС/Дмитрий Серебряков
«Такой показатель достигается за счет тщательной проверки данных при заключении договоров и разъяснительной работы с партнерами, агентами компании, — сообщили «Известиям» в пресс-службе компании. — Проверки проходят с лета 2020 года в автоматизированном режиме. Их цель — выявление случаев, когда страхователи намеренно занижают размер страховой премии по ОСАГО».
Страховщик также заверил, что ошибочные расторжения полисов с добросовестными страхователями единичны и рассматриваются в индивидуальном порядке.
Как обманывают посредники
Водители могут остаться без денег и страховки не только из-за собственных ошибок. Иногда оформить ОСАГО по низкой цене предлагают недобросовестные посредники, якобы имеющие связи в страховых компаниях. Нередко оказывается, что такие помощники вовсе не связаны со страховым бизнесом. От имени владельца они просто заполняют заявку, занижая ключевые параметры и внося ложные данные о самом страхователе.
«После получения от страховщика подписанного договора е-ОСАГО в формате PDF такой посредник с использованием специальных программных средств указывает в нем правильные данные автовладельца. После этого он направляет автовладельцу договор е-ОСАГО с его данными, а разницу в страховой премии забирает себе. Больше всего таких недобросовестных посредников работает в «красных» регионах с высокими рисками мошенничества в ОСАГО», — предупредили в Российском союзе автостраховщиков (РСА).
Фото: РИА Новости/Максим Богодвид
В «Росгосстрахе» подтвердили, что сталкивались с такой практикой.
«Автомобилист даже не догадывается, что его ответственность не застрахована — узнать об этом сегодня он может, только обратившись с таким полисом в компанию после страхового случая для урегулирования убытка. И отказ становится для него неприятной неожиданностью. По нашим данным, количество обращений в «Росгосстрах» с подобными полисами колеблется от нескольких десятков до сотни случаев ежемесячно», — предупредили корреспондента «Известий».
Причина «ошибок»
Эксперт и юрист в области автострахования Сергей Беляков в разговоре с «Известиями» высказал мнение, что подавляющее большинство ошибок, связанных с расторжением договоров, возникает из-за умышленных действий страхователей. При этом Беляков считает, что некоторым водителям приходится идти на такие шаги, потому что иначе страховые компании им просто отказывают — в первую очередь это относится к таксистам и жителям проблемных регионов.
«Такси — это убыточный сегмент, их многие просто не страхуют, — объясняет Беляков. — Есть также проблемные регионы, например Ульяновск, Ингушетия, Владивосток — там страховщики ни в какую работать не хотят и пробуют отменять договоры в надежде, что с ними не будут долго разбираться или судиться. Но в основном водители действительно пытаются занизить премию осознанно, и самый простой способ — уменьшить количество лошадиных сил. Округляют их в меньшую, а не большую сторону в надежде, что этого не заметят. Еще одна распространенная ошибка — смена адреса регистрации. Например, водитель оформил полис в Костроме, застраховался и переехал в Москву, где прописался. Конечно, в Костроме коэффициент будет ниже, но страховка работает по адресу регистрации страхователя, а не машины».
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Алексей Майшев
Беляков уточнил, что некоторые водители несерьезно относятся к заполнению анкеты, хотя она ничем не отличается от составления договора в офисе компании. «Проблема это не массовая, но поводов для страховых давать нельзя. По моей оценке, раньше так строго за ошибками в ключевых параметрах следили не все страховщики, но после либерализации тарифов ОСАГО в сентябре 2020 года водителей стали проверять тщательнее», — заключил эксперт.
Что делать добросовестному автовладельцу
В РСА признают, что водители действительно жалуются на случаи расторжения полисов е-ОСАГО, но пока такие случае единичны. Как объяснили в ассоциации «Известиям», если при заполнении данных на сайте страховщика автомобилист по ошибке ввел неверные данные, то ему предлагается их скорректировать на стадии заключения договора е-ОСАГО.
Внести последующие изменения в договор е-ОСАГО можно с доплатой части премии страховщику — если правильные данные привели к ее увеличению. Если же окажется, что с правильными данными полис ОСАГО стоит меньше, то часть премии, напротив, вернут. В случае если договор расторгли по причинам, с которыми водитель не согласен, сами страховщики советуют обращаться к ним в офис, чтобы разобраться в ситуации.
«При ошибочном расторжении договора автомобилист, безусловно, может его восстановить. Для этого необходимо обратиться в ближайший офис страховой компании и представить оригиналы документов. Также ВСК всегда становится на сторону клиента, если ситуация носит неоднозначный характер или клиент опечатался при заполнении некритичных параметров», — высказали в ВСК свою позицию.
Фото: ТАСС/Дмитрий Серебряков
А вот в Центробанке предлагают действовать более жестко и обращаться сразу к ним.
«Если гражданин считает, что его права нарушены, он может обратиться с жалобой в Банк России любым удобным способом», — посоветовали в ЦБ.
|
Россия / Russia МАКС (Московская акционерная страховая компания) Акционерное общество «Московская акционерная страховая компания» Регистрационный номер: 1427 Россия, 115184, г.Москва, ул. Малая Ордынка, д.50Страницы: 1 2 3 4 5 6
Банковское обозрение МариМедиа, Йошкар-Ола РБК daily-Санкт-Петербург Банковское обозрение Фонтанка.ру, Санкт-Петербург
Страницы: 1 2 3 4 5 6
Данные получены из открытых источников, пресс-служб компаний и организаций. Редакция портала не несет ответственности за возможные ошибки или неточности в приведенных данных и всячески приветствует указания на такие случаи с сообщением более точной, корректной или актуальной информации. |
ОСАГО от ВТБ и AgentApp
Для всех страховых механизм внесения изменений разный. Самый действенный способ — дойти до офиса СК и внести все изменения. Если это невозможно, ниже представлен список доступных изменений в личном кабинете каждой СК.Авторизация в личный кабинет клиента возможно только по данным, указанным во время оформления полиса!
АО «Тинькофф». Возможно внести любые изменения. Для этого страхователю необходимо позвонить на горячую линию страховой компании с номера, на который оформлен полис: 8(800)755-80-00.
Веб-сайт страховой компании: https://www.tinkoffinsurance.ru/
СПАО «Ингосстрах». Внести изменения можно на сайте страховой компании. Список доступных изменений: добавление водителя, изменить данные водителя, поменять гос. номер ТС, изменить данные ПТС/СТС.
Веб-сайт страховой компании: https://www.ingos.ru/
АО «АльфаСтрахование». На сайте alfastrah.ru представлен список доступных изменений: серия, номер ВУ, добавление водителя, гос. номер ТС, ТС используется с прицепом, удаление водителя.
Веб-сайт страховой компании: https://www.alfastrah.ru/
АО «Группа Ренессанс Страхование» Внести изменений возможно на сайте страховой компании. Для просмотра полного списка возможных изменений необходимо авторизоваться в личном кабинете страховой компании.
Веб-сайт страховой компании: https://www.renins.ru/
ООО «СК «Согласие». Внести изменения можно на сайте страховой компании. Список доступных изменений: внесение нового водительского удостоверения, изменение данных водителей, дополнение данных собственника, изменение гос. номера ТС.
Веб-сайт страховой компании: https://lk.soglasie.ru/
САО «ВСК» тел. 8(800)775-15-75. Внесение изменений возможно только в офисе СК. Подробную информацию необходимо уточнить на сайте страховой компании.
Веб-сайты страховых компаний: https://www.vsk.ru/
ПАО СК «Росгосстрах» тел. 8(800)200-0-900. Внесение изменений возможно только в офисе СК. Подробную информацию необходимо уточнить на сайте страховой компании: https://www.rgs.ru/
«Mafin» (ООО «Абсолют Страхование») . Есть несколько способов внести изменения. Страхователю необходимо позвонить в контакт-центр: 8-800-555-1-555 или написать на почту: [email protected] . Можно скачать мобильное приложении и внести изменения.
АО «МАКС». Внести изменения можно в офисе страховой компании, в личном кабинете на сайте компании, либо написать на почту: [email protected]
Веб-сайт страховой компании: https://www.makc.ru/
ООО «Зетта Страхование». Внести изменения можно в личном кабинете на сайте, а также в офисе компании. Телефон круглосуточного контакт-центра
8 800 700 77 07 (звонок по РФ бесплатный).
Веб-сайт страховой компании:https://www.zettains.ru/
АО «СОГАЗ». Внести изменения можно в личном кабинете на сайте страховой компании, в мобильном приложении или в офисе компании. Телефон круглосуточного контакт-центра: 8 800 333 0 888. Веб-сайт страховой компании: https://www.sogaz.ru/
АО «ГСК «Югория» тел 8 800 100-82-00. Внести изменения можно в офисе страховой компании или на сайте: https://www.ugsk.ru/
ОСАГО в компании Страховая компания макс в Бугуруслане
Тип транспортаМотоциклы, мопеды и легкие квадроциклы («A», «M»)Легковые автомобили юридических лиц («B», «BE»)Легковые автомобили («B», «BE»)Легковые автомобили такси («B», «BE»)Автобусы с числом пассажирских мест более 16 («D», «DE»)Автобусы с числом пассажирских мест до 16 включительно («D», «DE»)Автобусы, используемые на регулярных перевозках с посадкой и высадкой пассажиров («D», «DE»)Грузовые автомобили с разрешенной максимальной массой 16 тонн и менее («C», «CE»)Грузовые автомобили с разрешенной максимальной массой более 16 тонн («C», «CE»)Трамваи («Tm»)Троллейбусы («Tb»)Тракторы, самоходные дорожно-строительные и иные машины , за исключением транспортных средств, не имеющих колесных движителей
Срок страхования (период использования автомобиля)1 год9 месяцев8 месяцев7 месяцев6 месяцев5 месяцев4 месяца3 месяца
Возраст водителяот 16 до 21 годаот 22 до 24 летот 25 до 29 летот 30 до 34 летот 35 до 39 летот 40 до 49 летот 50 до 59 лет60 и старше
Стаж вожденияменее 1 года1 год2 года3 — 4 года5 — 6 лет7 — 9 лет10 — 14 летболее 15 лет
Скидка за безаварийную езду (КБМ)Страхование впервые (класс 3, кбм 1)1 год без аварий (класс 4, кбм 0,95)2 года без аварий (класс 5, кбм 0,9)3 года без аварий (класс 6, кбм 0,85)4 года без аварий (класс 7, кбм 0,8)5 лет без аварий (класс 8, кбм 0,75)6 лет без аварий (класс 9, кбм 0,7)7 лет без аварий (класс 10, кбм 0,65)8 лет без аварий (класс 11, кбм 0,6)9 лет без аварий (класс 12, кбм 0,55)10 лет без аварий(класс 13, кбм 0,5)(класс M, кбм 2,45)(класс 0, кбм 2,3)(класс 1, кбм 1,55)(класс 2, кбм 1,4)
РегионБарнаулГорно-АлтайскПрочие города и населенные пункты Алтайского крайЗаринск, Новоалтайск, РубцовскБийскСвободныйБелогорскБлаговещенскПрочие города и населенные пункты Амурской областиКотласПрочие города и населенные пункты Архангельской областиСеверодвинскАрхангельскПрочие города и населенные пункты Астраханской областиАстраханьГубкин, Старый ОсколПрочие города и населенные пункты Белгородской областиБелгородКлинцыПрочие города и населенные пункты Брянской областиБрянскМуромПрочие города и населенные пункты Владимирской областиГусь-ХрустальныйВладимирКамышин, МихайловкаПрочие города и населенные пункты Волгоградской областиВолжскийВолгоградПрочие города и населенные пункты Вологодской областиЧереповецВологдаБорисоглебск, Лиски, РоссошьПрочие города и населенные пункты Воронежской областиВоронежНенецкий автономный округПрочие города и населенные пункты Еврейской автономной областиБиробиджанЧитаПрочие города и населенные пункты Забайкальского крайКраснокаменскКинешмаШуяПрочие города и населенные пункты Ивановской областиИвановоШелеховАнгарскБратск, Тулун, Усть-Илимск, Усть-Кут, ЧеремховоУсолье-СибирскоеИркутскПрочие города и населенные пункты Иркутской областиПрочие города и населенные пункты Калининградской областиКалининградКалугаПрочие города и населенные пункты Калужской областиОбнинскПрочие города и населенные пункты Камчатского краяПетропавловск-КамчатскийПрочие города и населенные пункты Кемеровской областиБелово, Березовский, Междуреченск, Осинники, ПрокопьевскКемеровоНовокузнецкАнжеро-Судженск, Киселевск, ЮргаПрочие города и населенные пункты Кировской областиКирово-ЧепецкКировКостромаПрочие города и населенные пункты Костромской областиПрочие города и населенные пункты Краснодарского краяКраснодарНовороссийскАрмавир, Сочи, ТуапсеБелореченск, Ейск, Кропоткин, Крымск, Курганинск, Лабинск, Славянск-на-Кубани, Тимашевск, ТихорецкАнапа, ГеленджикПрочие города и населенные пункты Красноярского краяКрасноярскАчинск, ЗеленогорскЖелезногорск, НорильскКанск, Лесосибирск, Минусинск, НазаровоШадринскПрочие города и населенные пункты Курганской областиКурганЛенинградская областьПрочие города и населенные пункты Курской областиЖелезногорскКурскЕлецЛипецкПрочие города и населенные пункты Липецкой областиМагаданПрочие города и населенные пункты Магаданской областиМоскваМосковская областьАпатиты, МончегорскПрочие города и населенные пункты Мурманской областиМурманскСевероморскКстовоПрочие города и населенные пункты Нижегородской областиНижний НовгородБалахна, Бор, ДзержинскАрзамас, Выкса, СаровПрочие города и населенные пункты Новгородской областиВеликий НовгородБоровичиБердскПрочие города и населенные пункты Новосибирской областиНовосибирскКуйбышевИскитимОмскПрочие города и населенные пункты Омской областиОрскОренбургПрочие города и населенные пункты Оренбургской областиБугуруслан, Бузулук, НовотроицкПрочие города и населенные пункты Орловской областиОрелЛивны, МценскПрочие города и населенные пункты Пензенской областиЗаречныйКузнецкПензаЛысьва, ЧайковскийПермьПрочие города и населенные пункты Пермского краяСоликамскБерезники, КраснокамскПрочие города и населенные пункты Приморского краяВладивостокУссурийскАрсеньев, Артем, Находка, Спасск-ДальнийПсковВеликие ЛукиПрочие города и населенные пункты Псковской областиРеспублика АдыгеяПрочие города и населенные пункты АлтаяИшимбай, Кумертау, СалаватСтерлитамак, ТуймазыУфаПрочие города и населенные пункты республики БашкортостанБлаговещенск, ОктябрьскийПрочие города и населенные пункты БурятииУлан-УдэБуйнакск, Дербент, Каспийск, Махачкала, ХасавюртПрочие города и населенные пункты ДагестанаПрочие города и населенные пункты ИнгушетииНазраньМалгобекПрочие города и населенные пункты Кабардино-БалкарииНальчик, ПрохладныйЭлистаКарачаево-Черкесская РеспубликаПрочие города и населенные пункты КалмыкииПетрозаводскПрочие города и населенные пункты КарелияПрочие города и населенные пункты КомиСыктывкарУхтаПрочие города и населенные пункты КрымаСимферопольПрочие города и населенные пункты Марий ЭлЙошкар-ОлаВолжскПрочие города и населенные пункты МордовияРузаевкаСаранскНерюнгриЯкутскПрочие города и населенные пункты ЯкутииВладикавказПрочие города и населенные пункты Северной ОсетииЕлабугаПрочие города и населенные пункты ТатарстанаБугульма, Лениногорск, ЧистопольАльметьевск, Зеленодольск, НижнекамскНабережные ЧелныКазаньПрочие города и населенные пункты ТываКызылВоткинскГлазов, СарапулПрочие города и населенные пункты УдмуртияИжевскЧеченская РеспубликаПрочие города и населенные пункты ХакасияАбакан, Саяногорск, ЧерногорскНовочебоксарскПрочие города и населенные пункты ЧувашииКанашЧебоксарыРостов-на-ДонуПрочие города и населенные пункты Ростовской областиВолгодонск, Гуково, Каменск-Шахтинский, Новочеркасск, Новошахтинск, Сальск, ТаганрогШахтыБатайскАзовПрочие города и населенные пункты Рязанской областиРязаньПрочие города и населенные пункты Самарской областиЧапаевскНовокуйбышевск, СызраньТольяттиСамараСанкт-ПетербургЭнгельсБалаково, Балашов, ВольскПрочие города и населенные пункты Саратовской областиСаратовПрочие города и населенные пункты Сахалинской областиЮжно-СахалинскЕкатеринбургБерезовский, Верхняя Пышма, Новоуральск, ПервоуральскАсбест, РевдаВерхняя Салда, ПолевскойПрочие города и населенные пункты Свердловской областиСевастопольСмоленскВязьма, Рославль, Сафоново, ЯрцевоПрочие города и населенные пункты Смоленской областиБуденновск, Георгиевск, Ессентуки, Минеральные воды, Невинномысск, ПятигорскКисловодск, Михайловск, СтавропольПрочие города и населенные пункты Ставропольского краяПрочие города и населенные пункты Тамбовской областиМичуринскТамбовВышний Волочек, Кимры, РжевПрочие города и населенные пункты Тверской областиТверьСеверскПрочие города и населенные пункты Томской областиТомскТулаПрочие города и населенные пункты Тульской областиАлексин, Ефремов, НовомосковскУзловая, ЩекиноПрочие города и населенные пункты Тюменской областиТюменьТобольскПрочие города и населенные пункты Ульяновской областиДимитровградУльяновскКомсомольск-на-АмуреХабаровскАмурскПрочие города и населенные пункты Хабаровского краяЧукотский автономный округПрочие города и населенные пункты Ханты-Мансийского автономного округаХанты-МансийскСургутНефтеюганск, НяганьНижневартовскКогалымПрочие города и населенные пункты Челябинской областиКопейскЧелябинскМагнитогорскЗлатоуст, МиассСатка, ЧебаркульНовый УренгойПрочие города и населенные пункты Ямало-Ненецкого автономного округаБайконурНоябрьскЯрославльПрочие города и населенные пункты Ярославской области
Посчитать
Оформить Полис Осаго Макс – Telegraph
🛑 👉🏻👉🏻👉🏻 ИНФОРМАЦИЯ ДОСТУПНА ЗДЕСЬ ЖМИТЕ 👈🏻👈🏻👈🏻
Как купить полис ОСАГО в СК » МАКС » онлайн? — Все про КАСКО и ОСАГО онлайн: расчет…
Оформить электронный полис ОСАГО « МАКС » онлайн: как рассчитать цену и сделать страховку…
Купить МАКС ОСАГО ~ Оформить электронный полис онлайн
ОСАГО МАКС : электронный полис онлайн, рассчитать и оформить на автомобиль
ОСАГО онлайн СК Макс : как оформить и тарифы в 2020 году
Как оформить электронное ОСАГО в страховой компании Макс ?
ОСАГО Макс — онлайн, рассчитать, оформить , выплаты, отзывы
Страховка Ресо Онлайн Купить На Авто Осаго
Рса Осаго
Сайт Сравни Ру Страхование Авто
Проверка Осаго По Гос Номеру
Нужен Страхового Полиса Осаго
Добавить В Страховку Осаго Еще Человека Онлайн
Навязывают Страхование Жизни Осаго
Rgs Ru Официальный Сайт Осаго Онлайн
Страховка На Автомобиль Через Интернет Ресо Гарантия
Оформить Страховку На Автомобиль Дешево
Страхование Осаго Где Дешевле
Осмотр Машины Для Осаго
Выбрать Полис Осаго На Сравни Ру
Статус Полиса Осаго По Базе Рса
Сервис Проверки Осаго
Огэ По Осаго Видео
Коэффициент Без Ограничений Осаго 2021
Дтп Осаго Что Делать Пострадавшему 2021
Новое Осаго Изменения 2021
Страховой Полис Осаго Онлайн Рассчитать Росгосстрах
Страховка Авто Вологда
Список Документов Для Страховки Автомобиля
Страховой Омбудсмен По Осаго
Росгосстрах Официальный Сайт Страховка Машины Онлайн
Проверить Скидку Осаго Рса
Страхование Осаго В 1с 8.3
Альфастрахование Санкт Петербург Телефон Горячей Линии Осаго
Согласие Страховая Компания Распечатать Полис Осаго
Страховка Для Такси Осаго Цена В Москве
Поиск Полиса Осаго
Осаго По Вин Коду Автомобиля
Росгосстрах Осаго Белгород Телефон
Полис Осаго Нижний Тагил
Срок Рассмотрения Претензии По Осаго 2021
Макс Рассчитать Страховку Осаго Онлайн
Шрифт Осаго Какой
Reso Ru Личный Кабинет Осаго
Осаго При Покупке Машины
Страхование Осаго Днр
Страхование Осаго Без Диагностической Карты
Сравни Ру Осаго Страхование Москва
Е Осаго Согаз Купить Онлайн
Альфа Онлайн Страхование Осаго Личный
1 Марта Страховка Авто
Совкомбанк Страхование Осаго Адреса
Сколько Стоит Страховка На Машину Без Стажа
Калькулятор Осаго Хабаровск
Добровольная Страховка Автомобиля
Осаго Если Попал В Аварию
Сделать Осаго Онлайн Рса
Внесение Изменений В Осаго Ренессанс
На Машину Нет Страховки Какое Наказание
Как Вернуть Деньги За Е Осаго
Картинка Страхования Автомобиля
Где Застраховать Такси По Осаго В Москве
Купить Полис Осаго Выгодно
Срок Действия Осаго После Истечения Срока
Штрафы Гибдд За Отсутствия Осаго
Страховка При Покупке Машины В Кредит
Осаго Ростов На Дону Без Дополнительных Услуг
Территория Осаго 2021
Тиньков Ру Осаго
Как Добавить В Страховку Осаго Еще Человека
Госстрах Осаго Цена
Страховая Компания Мало Выплатила По Осаго
Посчитать Сумму Страховки Осаго
Стоимость Страховки На Автомобиль Калькулятор Росгосстрах
Услуги Осаго Воронеж
Калькулятор Рассчитать Страховку Авто
Полис Осаго Онлайн Краснодар
Вождение Авто Без Страховки
Росгосстрах Осаго Фото
Осаго Росгосстрах Официальный Сайт Купить Страховой
Ингосстрах Осаго Проверить По Номеру
Как Отказаться От Страховки Авто
Полис Осаго Проводки В 1с 8.3
Осаго Новосибирск Адреса И Телефоны
Расчет Стоимости Осаго Согаз Онлайн Калькулятор
Досрочное Прекращение Осаго При Продаже Автомобиля
Страховка Осаго Без Выплат
Как Расторгнуть Договор Осаго Росгосстрах
Рса Горячая Линия По Осаго
Можно Ли Получить Полис Осаго Без Техосмотра
Рассчитать Полис Осаго Для Автомобиля
Рассчитать Кмб Для Осаго Онлайн
Осаго Авто Отзывы
Обязательно Ли Страхование Осаго
Сколько Действительно То Для Осаго
Сделать Осаго В Спб
Е Осаго Вск Купить
Полис Осаго С Ограничениями Что Это
Осаго Тольятти Без Дополнительных
Начало Срока Действия Полиса Осаго
Стоимость Осаго 150 Л С
Можно Продать Машину Без Осаго
Осаго Прописка В Деревне
Каско Если Нет Осаго У Виновника
Альфастрахование Новокузнецк Телефон Осаго
Тарифная Ставка Осаго
Росгосстрах Осаго Обратная Связь
Сколько Стоит Страховка На Легковой Автомобиль
Электронная Версия Осаго
Штраф За Управление Авто Без Страховки
Проверка Полиса Осаго По Базе
Согаз Страхование Осаго Адреса
Купить Полис Осаго Онлайн В Приозерске
Горячая Линия По Осаго Россия
Курсы Для Агента По Осаго Онлайн Бесплатно
Страховка Онлайн Автомобиля Тинькофф Осаго
Документы Для Получения Осаго 2021
Доп Осаго Альфастрахование
Росгосстрах Страховка Осаго Срок
Страховка Осаго Стаж
15 Фз Об Осаго
Мошенничество Со Страховкой Автомобиля Наказание
Стань Страховым Агентом Осаго
Осаго Онлайн На Грузовой Авто
Страхование Квадроцикла Осаго Онлайн Калькулятор
Электронное Осаго Купить В Самаре Онлайн
Оплатить Страховку На Машину Через Интернет
Посмотреть Полис Осаго По Гос Номеру
Порядок Оформления Осаго В 2021 Году
Страховка Машины Во Время Карантина
Возмещение По Осаго Альфастрахование
Осаго Страхование Гражданской Ответственности
Страхование Авто Сургут
Росгосстрах Вписать В Осаго Водителя
Максимальное Возмещение По Осаго
Ремонт По Каско Утс По Осаго
Страхование Машины Курск
Дтп Без Осаго
Электронный Полис Осаго Купить Онлайн В Кемерово
Пробить Осаго По Рса
Страховка Осаго Онлайн Купить Ренессанс Страхование
Купить Полис Осаго Интернет Osago 365 Ru
Рса Проверить Наличие Осаго По Вин
Страховые Компании В Коврове Осаго
Ингосстрах Выплаты По Осаго 2021 Отзывы
Диагностическая Карта Для Осаго На Тимирязевской
Онлайн Альфа Страхования Машины
Действие Договора Осаго
Сайт Омбудсмена По Осаго
Можно Ли Заключить Осаго На 6 Месяцев
Сделать Страховку Осаго
На Сколько Дорожает Страхование Осаго После Аварии
Новые Тарифы Осаго 2021
Кт Осаго Санкт Петербург
Купить Осаго В Волгограде Красноармейский Район
Росгосстрах Осаго Онлайн Продлить Полис Через Госуслуги
Страховой Агент Осаго Онлайн
Можно Перенести Страховку На Другую Машину
Альфастрахование Осаго Отзывы Клиентов По Выплатам
Надо Возить С Собой Полис Осаго
Вернуть Деньги За Страховку Машины Альфастрахование
Возмещение Вреда Осаго
Оформить Полис Осаго Макс
Бесплатное фото Страховой полис автомобиля Osago
наибольший размер 4032 × 3024 пикселей, вы можете скачать его в формате JPG. Нас отметили: Osago, Страховой полис, Автострахование.
Великолепное изображение, которое вы можете бесплатно использовать в самых разных целях: публикация, печать, обои, коммерческие продукты … и т. Д. Использование лицензии Creative Commons Zero — CC0. Реферальная ссылка на Max Pixel (не требуется).
Если это полезно для вас, поделитесь, пожалуйста, с друзьями.Перед выступлением здесь наша команда была тщательно отобрана. Кроме того, вы также можете поблагодарить их, пригласив одну чашку кофе.
Наша система искусственного интеллекта выбирает и предлагает несколько фотографий той же категории. Надеюсь, это поможет вам.
Социальные сети, Подключение, Иконки, Интернет, Интернет
Телефон, Дисплей, Приложения, Приложения, Экран
Калькулятор, Расчет, Страхование, Финансы, Бухгалтерский учет
Поскользнуться, Опасность, Неосторожный, Скользкий, Несчастный случай, Риск
Инвалидная коляска, инвалидность, травмированные, инвалиды, инвалиды
Монеты, Валюта, Инвестиции, Страхование, Наличные, Банковское дело
Бумага, Шредер, Хлопья, Переработка, Вырезать, Измельченная бумага
Монеты, Валюта, Инвестиции, Страхование, Наличные, Банковское дело
Калькулятор, Расчет, Страхование, Финансы, Бухгалтерский учет
Бундестаг, Флаг Германии, Рейхстаг, Бундестагсваль
Рукопожатие, Руки, Ноутбук, Монитор, Онлайн, Цифровой
Здание, Париж, Архитектура, Туры, Франция, Эспланада
Осаго Страховой полис Бесплатные фото Бесплатные изображения Макс Пиксель
Селективность за счет дискриминационной индуцированной подгонки позволяет переключать специфичность кофермента NAD (P) H в енредуктазах Old Yellow Enzyme
Abstract
Большинство енредуктаз принадлежат к семейству флавин-зависимых оксидоредуктаз Old Yellow Enzyme (OYE).OYE используют коферменты никотинамида в качестве доноров гидридов, чтобы катализировать восстановление алкенов, содержащих электроноакцепторную группу. Было проведено множество исследований структур и каталитических механизмов OYE. Однако происхождение специфичности кофермента в семействе OYE неизвестно. Структурный ЯМР и данные рентгеновской кристаллографии были использованы для рационального конструирования вариантов двух OYE, пентаэритритолтетранитратредуктазы (PETNR) и морфинонредуктазы (MR), чтобы обнаружить основы селективности кофермента.PETNR имеет двойную специфичность и реагирует с NADH и NADPH; MR принимает только НАДН в качестве донора гидрида. Варианты мотива β-шпильки в петле активного сайта обоих этих ферментов были изучены с помощью спектроскопии с остановленным потоком. Особое внимание было уделено потенциальной роли остатков аргинина в мотиве β-шпильки. Мутагенез продемонстрировал, что Arg130 определяет предпочтение PETNR для NADPH и что Arg142 взаимодействует с пирофосфатной группой кофермента. Эти наблюдения были использованы для переключения специфичности кофермента в MR путем замены Glu134 или Leu146 остатками аргинина.Эти варианты имели повышенное (~ 15-кратное) сродство к НАДН. Мутагенез позволил MR принять НАДФН в качестве донора гидрида, при этом E134R MR показал значительное (55-кратное) увеличение эффективности восстановительной полуреакции по сравнению с по существу нереактивным ферментом дикого типа. Таким образом, понимание вопроса о селективности коферментов в OYE было решено путем рациональной модернизации. Это должно позволить улучшить селективность кофермента и переключить его на другие OYE.
Ключевые слова: коферментная специфичность , енредуктазы, кинетика ферментов, старые желтые ферменты, рациональный дизайн ферментов
Введение
В последние годы наблюдается постепенный переход от традиционных методов синтеза к более экологически чистым и устойчивым подходам в производстве тонкой химии 1, 2, 3, 4.Разработка новых химиоэнзиматических подходов к производству ценных химикатов обусловлена постоянно растущими знаниями о структурах и механизмах ферментов, а также достижениями в метаболической инженерии и синтетической биологии. Асимметричное восстановление активированных связей C = C — одна из наиболее широко используемых в промышленности химических реакций, биокаталитические пути которой интенсивно исследуются 5, 6. Стереоселективное восстановление алкенов, содержащих электроноакцепторную группу, катализируется большим семейством соединений. ферменты, известные под общим названием «енредуктазы» 7, 8, 9.Большинство енредуктаз являются гомологами семейства оксидоредуктаз 9, 10 Old Yellow Enzyme (OYE), большого семейства флавинмононуклеотидных (FMN) -зависимых ферментов, которые используют коферменты NADH и / или NADPH в качестве вспомогательных доноров гидридов 10, 11 , 12, 13. Обширные исследования способствовали широкому спектру приложений катализа с использованием OYE, включая их использование в индивидуальных биокаталитических реакциях 14, в качестве компонентов множественных ферментативных 15, 16, 17, 18, 19 и хемоферментных каскадных реакций 20, а также в реакции биотрансформации целых клеток 21.Эти исследования также стимулировали разработку эффективных систем утилизации никотинамидного кофермента 22, 23, 24, биомиметических аналогов и использование кофермент-независимых методов восстановления 25, 26, 27, 28, 29. В частности, использование коферментных биомиметиков и биомиметиков. Системы восстановления без коферментов привлекают в последнее время внимание в связи с биокаталитическим восстановлением. Однако их использование ограничено в инженерных приложениях клеточных фабрик, где природные коферменты необходимы для управления потоком по естественным и искусственным метаболическим путям, для обеспечения круговорота коферментов и поддержания окислительно-восстановительного баланса.В этих случаях необходимо использовать самодостаточные системы рециркуляции с замкнутым циклом и иметь возможность прогнозировать коферментную специфичность для удовлетворения требований путей и клеток.
Расширение диапазона субстратов для асимметричного биовосстановления и улучшения химио-, регио- и стереоселективности целевых соединений широко сообщалось с OYEs 15, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Однако, несмотря на эти достижения, мало что известно об основах связывания кофермента и селективности в OYE.Большинство из них используют НАДФН в качестве предпочтительного донора гидрида, но некоторые демонстрируют более высокое сродство и / или реактивность с НАДН 40, 41, 42. И наоборот, другие могут использовать оба никотинамидных кофермента (НАДН и НАДФН) 26. Идентичность последовательностей у разных членов OYE семейство обычно не консервативно (<15% консервативных остатков во всех трех классах OYE), а четвертичные структуры варьируются от мономеров до додекамеров 10. Однако большинство ферментов OYE разделяют высококонсервативную архитектуру мономеров, (α, β) 8 -Бочкообразная структура (также известная как складка TIM 43, 44) с кофактором FMN, нековалентно связанным в С-концевой области β-тяжей (рис.). Несмотря на это сходство, аминокислотные остатки и / или структурные мотивы, определяющие коферментную специфичность, неизвестны. В других дегидрогеназах / редуктазах (например, на основе складки Россмана) дискриминация коферментов частично обусловлена взаимодействиями с аденин-2′-фосфатом (NADPH) или аденин-2′-гидроксилом (NADH; нумерацию см. На рис.) 45, 46. Недавние исследования также подтвердили, что специфичность коферментов может быть сконструирована с помощью эвристических подходов, включающих управляемые структурой, полурациональные стратегии для энзимной инженерии 47.В классе енредуктазы рентгеновские кристаллографические структуры доступны для нескольких OYE в комплексе с имитаторами восстановленного кофермента [например, 1,4,5,6-тетрагидро-NAD (P), (NAD (P) H 4 )], но понимание этих структур ограничено. В то время как многослойное расположение никотинамидной части NAD (P) H и изоаллоксазинового кольца FMN сохраняется в этих структурах, коферментный «хвост» (рис.) Часто неупорядочен или находится в различных конформациях, некоторые из которых искусственно индуцируются коферментом-коферментом. стекинг взаимодействий в кристалло .Именно этот «хвост» различается между НАДН и НАДФН, и его взаимодействие (я) с ферментом лежит в основе молекулярной основы селективности кофермента.
Наложенные структуры не содержащей коферментов и связанной с коферментами пентаэритритолтетранитратредуктазы. Структуры окисленного тэна (PDB: 5LGX) и тэна: NADH 4 комплекс (PDB: 3KFT) показан розовым и бирюзовым рисунками соответственно, а структурный мотив β-шпильки выделен красным. На средней панели представлен более подробный вид активного сайта и мотива β-шпильки с кофактором FMN (желтый), NADH 4 имитатор кофермента (синий) и два остатка аргинина из мотива β-шпильки (зеленый в холоферменте, оранжевый в связанном с коферментом PETNR) выделены палочками.Структура NAD (P) H показана на правой панели [R = H (NADH) или R = PO 3 2- (НАДФН)], причем «хвостовая» часть показана синим цветом, а ключевые атомы помечены.
Недавно мы сообщили о первом и единственном структурном назначении ЯМР члена семейства OYE, пентаэритритолтетранитратредуктазы (PETNR) 48, 49. PETNR — это широко изученная енредуктаза с широким спектром субстратов. Это мономерный фермент 40 кДа, который использует как НАДН, так и НАДФН, но предпочтительно реагирует с НАДФН 50, 51, 52.Как и все OYE, реакция, катализируемая PETNR, происходит по одноузловому механизму пинг-понга, включающему восстановительную полуреакцию (RHR; перенос гидрида от атома водорода C4 pro -R NAD (P) H к FMN N5 атома) и окислительной полуреакции (перенос гидрида от FMN N5 и перенос протона от растворителя к окисляющему субстрату, обычно ан-α, β-ненасыщенному алкену) 53, 54. Диапазон возмущений химического сдвига ЯМР в активном центре фермента наблюдались при связывании кофермента.Однако эти данные также выявили большую переориентацию структурного мотива β-шпильки (остатки T129-T147; Fig.) При связывании кофермента, что указывает на механизм индуцированной подгонки. Основные нарушения химического сдвига наблюдались, в частности, для T131 и соседнего R130, с более выраженными эффектами с NADPH 4 по сравнению с NADH 4 49. Это кофермент-специфическое связывание за счет индуцированной подгонки контрастирует с предыдущей рентгеновской кристаллической структурой. который теперь, по-видимому, находится в «открытой» конформации 50.
Основываясь на исследованиях ЯМР, мы решили определить молекулярную основу распознавания кофермента в PETNR. Затем мы попытались рационально настроить / переключить коферментную специфичность с помощью белковой инженерии PETNR с двойной специфичностью и связанной с ней НАДН-зависимой морфинонредуктазы (MR) 42, 55. При этом мы идентифицировали структурные детерминанты коферментной специфичности в этих OYE. в гибком и плохо законсервированном кофермент-связывающем кармане. На основе представленной рациональной инженерии мы также предлагаем, как белковая инженерия может быть использована для настройки специфичности кофермента для других оксидоредуктаз OYE, чтобы облегчить будущие применения в биокатализе и инженерии клеточных фабрик.
Результаты и обсуждение
Остаток Arg130 в лоскуте β-шпильки регулирует специфичность PETNR по отношению к NADPH
Недавние исследования 1 H- 15 N TROSY ЯМР-исследования PETNR: NAD (P) H 4 комплексов показали потенциальная роль остатка Arg130 в дифференциальном связывании NADPH и NADH. Помимо возмущений, наблюдаемых в локализованных областях активного центра при связывании либо NADH 4 , либо NADPH 4 , значительные нарушения химического сдвига также наблюдаются в структурном мотиве β-шпильки (рис.) 49. Внутри этого β-шпилечного лоскута наблюдались заметные различия в химическом сдвиге между двумя комплексами, что указывает на то, что каждый кофермент по-разному изменяет ориентацию структурного мотива, что, возможно, предполагает взаимодействие между Arg130 и 2′-фосфатом NADPH. . Однако при изучении рентгеновских кристаллических структур PETNR и связанного с NADH 4 PETNR (рис.) Взаимодействие между Arg130 и связанным коферментом кажется маловероятным. Рентгеновская кристаллическая структура PETNR, связанного с NADH 4 , указывает на то, что боковая цепь Arg130 обращена к внешней стороне канала активного центра и направлена от хвоста кофермента никотинамида.В частности, гуанидино-фрагмент Arg130 отстоит на> 7 Å от пирофосфата и на> 10 Å от 2′-гидроксильной группы связанного NADH 4 . Для исследования взаимодействия Arg130 с NAD (P) H были созданы нейтральные варианты R130M и R130L, а также отрицательно заряженный вариант R130E. RHR каждого варианта характеризовали спектроскопией остановленного потока. Зависимость наблюдаемой скорости восстановления ЖМК ( к obs ) от концентрации НАДН и НАДФН при 25 ° C (рис. S1 – S4), и кинетические параметры, полученные путем подгонки наблюдаемых констант скорости к уравнению.показаны на рис., вместе с ранее сообщенными значениями для PETNR 49 дикого типа (WT), представленными для сравнения.
Кинетические параметры для RHR вариантов PETNR WT, R130L, R130M и R130E с (A) NADH и (B) NADPH. Кинетические параметры представлены в виде столбцов с одинаковыми логарифмическими осями и на обеих панелях для лучшего сравнения. * Кинетика восстановления FMN в R130E PETNR с NADPH следует реакции второго порядка с константой скорости k , представленной вместо k красный / K S значение.** В данном случае k красный Константа имеет приблизительное верхнее предельное значение, рассчитанное путем умножения константы скорости второго порядка ( k ) на максимальный предел растворимости NADPH в растворе ( K S ~ 150 мм) и K S Значение , представляющее предел растворимости, показано в виде полос, перечеркнутых черными линиями. Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки подгонки. Все кинетические параметры приведены в таблицах S1 и S2.
kobs = krev + kredNADPHKS + NADPH
(1)
PETNR дикого типа снижается как NADH, так и NADPH, причем NADPH имеет предельную константу скорости ( k красный ) значение в 17 раз выше, чем НАДН, и в 10 раз более высокое сродство к НАДФН ( K S из 0.1 мм), чем для NADH 49. Следовательно, NADPH является предпочтительным коферментом для PETNR WT с общей эффективностью для выполнения RHR ( k красный / K S ) в 170 раз выше, чем NADH. Однако, воздействуя на Arg130 из PETNR, мы наблюдали значительные зависимые от кофермента изменения этих кинетических параметров (Рис.). Значения всех кинетических параметров для реакций R130L, R130M и R130E PETNR с NADH в целом поддерживаются, и единственными заметными различиями являются наличие двух кинетических фаз для восстановления FMN в R130L и R130M PETNR (рис. S1 – S4; множественные кинетические фазы, приписываемые конформационной гетерогенности в активном центре, ранее наблюдались в других енредуктазах OYE 49, 56) и трехкратное снижение сродства NADH ( K S ) и КПД ( k красный / K S ) для R130E.Эти результаты предполагают, что Arg130 не играет главной роли в связывании NADH с PETNR. Вероятно, что умеренные изменения, наблюдаемые в кинетических параметрах, являются распространяющимся эффектом замены, то есть заставляя другие близлежащие остатки с функциональной ролью принимать другую конформацию или создавая небольшое электростатическое отталкивание в случае варианта R130E. .
Напротив, оба варианта PETNR R130L и R130M показывают заметно сниженные скорости переноса гидрида в их реакции с NADPH.Обратная скорость реакции ( k об. = 0,46 ± 0,11 с ( -1 для обоих вариантов) и поразительное> 80-кратное снижение значений сродства к фосфорилированному коферменту. Это снижает эффективность RHR ( k красный / K S ) до значений, аналогичных реакции WT, R130L и R130M PETNR с NADH. Как и ожидалось, наиболее выраженное влияние на аффинность связывания NADPH с PETNR наблюдается для варианта R130E.В этом случае замена положительно заряженной гуанидиногруппы на отрицательно заряженный карбоксилат предотвращает образование стабильного комплекса. Вместо этого восстановление FMN под действием NADPH в R130E PETNR является вторым порядком с константой скорости 0,09 ± 0,01 с -1 · мм. −1 и приблизительно k красный значение 13,5 с -1 (при условии максимальной растворимости НАДФН 150 мм). Примерный верхний предел тыс. красный , использованный в этом исследовании, позволяет лучше сравнить каталитическую эффективность между вариантами, демонстрирующими кинетику второго порядка, в отличие от кинетики насыщения.Подобное снижение аффинности связывания при замене аргинина в активном центре глутаматом ранее наблюдалось в других НАДФН-зависимых дегидрогеназах 45.
Поскольку НАДН и НАДФН изоструктурны (за исключением 2′-гидроксил / фосфатных групп), поразительные различия в аффинности вариантов к этим коферментам указывают на то, что Arg130, вероятно, координирует 2′-фосфатную группу NADPH. Замена Arg130 на нейтральную аминокислоту аналогичной длины (Met или Leu) не приводит к различию между двумя коферментами, о чем свидетельствует сходство k красный / K S Значения для НАДН и НАДФН.Это в основном вызвано изменениями в аффинности, при этом скорость снижения FMN с помощью NADPH выше, чем с помощью NADH, во всех вариантах. Это указывает на то, что сайт Arg130 в основном участвует в предпочтительном связывании хвоста NADPH с ограниченными эффектами на расположение никотинамидного сайта для H-переноса.
Остаток Arg142 в β-шпильке PETNR координирует пирофосфатную группу никотинамидных коферментов
Вариант PETNR R130E, демонстрирующий умеренное снижение сродства к NADH, предполагает, что карбоксилат R130E может также нарушать связывание NADH и NADPH путем электростатического отталкивания. кофермент пирофосфатная группа.Значительные нарушения химического сдвига ЯМР Ile141 (также в лоскуте β-шпильки) наблюдались при связывании NADH 4 49, предполагая, что заряженные остатки в этой петле, вероятно, участвуют в связывании кофермента. Наиболее вероятный кандидат, Arg142, был нацелен на мутагенез путем замены остатками Leu и Glu. RHR вариантов R142L и R142E исследовали с помощью спектроскопии остановленного потока (рис. S5 – S6). Кинетические параметры этих измерений представлены на рис.
Кинетические параметры для RHR вариантов PETNR WT, R142L и R142E с (A) NADH и (B) NADPH.R142L_1 и R142L_2 обозначают две разные кинетические фазы, наблюдаемые для восстановления FMN в варианте R142L PETNR. Кинетические параметры представлены в виде столбцов с одинаковыми осями и на обеих панелях для лучшего сравнения. * В этих случаях кинетика восстановления FMN следует реакции второго порядка с константой скорости k , представленной вместо k красный / K S значение. ** к красный Константы являются приблизительными значениями верхнего предела, рассчитанными путем умножения константы скорости второго порядка ( k ) на максимальный предел растворимости NAD (P) H в растворе ( K S ~ 150 мм), и значение K S , представляющее предел растворимости, показано в виде полос, перечеркнутых черными линиями.Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки подгонки. Все кинетические параметры приведены в таблицах S1 и S2.
Примечательной особенностью реакции R142L PETNR как с NADH, так и с NADPH является наличие двух кинетических фаз, которые вносят вклад в общее изменение амплитуды при 465 нм. В случае NADH одна из фаз имеет кинетические параметры, аналогичные WT PETNR. Другая фаза, имеющая большую амплитуду, уменьшила k красный (0,82 ± 0,06 с −1 ) и повышенный K S (5.07 ± 1,87 мм) значения. Это приводит к значительному снижению эффективности реакции. Реакция R142L с NADPH аналогична, с второстепенной фазой, показывающей кинетические параметры, которые сопоставимы с WT PETNR, и доминирующей кинетической фазой, которая, по-видимому, является вторым порядком ( k = 0,025 ± 0,001 с -1 · мм -1 ). RHR тэна R142E с NADH является монофазным и почти полностью нарушенным с восстановлением FMN после реакции второго порядка ( k = 0.034 ± 0,002 с -1 ), что сравнимо с доминирующей кинетической фазой R142L PETNR с NADPH. Реакция тэна R142E с NADPH еще более нарушена (константа скорости второго порядка 0,008 ± 0,002 с -1 · мм -1 ), что соответствует электростатическому столкновению между R142E и NADPH 2′-фосфатом. Что касается реакций WT, приблизительное максимальное значение первого порядка k красный Значения 5 с -1 и 0,4 с -1 могут быть оценены для RHR R142L PETNR с NADH и NADPH, соответственно, при насыщающих (150 мм) концентрациях NAD (P) H.
Удаление положительного заряда боковой цепи Arg142 приводит к заметному снижению способности фермента связывать как НАДН, так и НАДФН. Эти данные согласуются с тем, что Arg142 стабилизирует связанный НАД (Ф) Н посредством электростатических взаимодействий с пирофосфатной группой кофермента. Различия между реакциями R142E PETNR с NADH и NADPH и множественными кинетическими фазами, наблюдаемыми в реакциях R142L PETNR, могут возникать из-за альтернативных (и плохо реактивных) кофермент-связывающих конформаций, когда пирофосфатная группа образует ионную связь (и) с R130.Опять же, эти данные согласуются с механизмом индуцированной подгонки.
Изучение PETNR позволяет переключать коферментную специфичность в NADH-зависимом MR
Как упоминалось ранее, Arg130 расположен в лоскуте β-шпильки, который является частью большого хода полипептида, расположенного между цепью β3 и спиралью α3 TIM. бочкообразная структура ТЭНР (рис. и). Хотя этот мотив фермента фланкирован двумя консервативными областями через OYE (цепь β3 и спираль α3 являются важными вторичными структурными элементами стволовой складки TIM, см. Сохранение структурных особенностей в семействе на рис.A – F), идентичность последовательности этой петли не сохраняется у членов семейства OYE (Fig. G), что объясняет, почему общий мотив кофермент-связывающей последовательности не был идентифицирован для OYEs. Это заставляет задуматься, есть ли остатки, эквивалентные Arg130 в других OYE, и если да, то как идентифицировать эти остатки для создания новой селективности кофермента?
Структурная архитектура и множественное структурное выравнивание выбранных енредуктаз из класса I, II и III (по классификации 10) семейства OYE.Показаны структуры нескольких репрезентативных ферментов: (A) XenA (PDB: 3L5L), (B) YqjM (PDB: 1Z41), (C) OYE1 (PDB: 1OYA), (D) PETNR (PDB: 5LGX), ( E) MR (PDB: 1GWJ) и (F) ИГРУШКА (PDB: 3KRU). Структура OYE проиллюстрирована в виде карикатуры (окрашена в оранжевый цвет, а β-листы показаны зеленым цветом, что подчеркивает сохраненную архитектурную складку цилиндра TIM). Кофактор FMN показан в виде желтых палочек, а ход полипептида между цепью β3 и спиралью α3 цилиндра TIM показан синим цветом.(G) Множественное выравнивание последовательностей выбранных OYE, представленных в (A) — (F), вместе с еще двумя членами (XenB и CYE), для которых нет доступных кристаллических структур. Остатки, выделенные красным, сохраняются среди всех выбранных OYE, а те, которые выделены желтым, сохраняются только частично (обладая аналогичными физико-химическими свойствами). Каждая строка в первом столбце рисунка показывает регистрационный код Uniprot, за которым следует сокращенное название каждой енредуктазы.
MR представляет собой димер и использует НАДН в своем естественном каталитическом цикле 42, 55.Он на 51% идентичен последовательности с PETNR, и субъединичные рентгеновские кристаллические структуры двух ферментов схожи. MR также имеет лоскут β-шпильки в положении, аналогичном положению PETNR. Сравнение области β-шпильки в PETNR и MR показывает, что MR не обладает остатками, эквивалентными Arg130 и Arg142, обнаруженным в PETNR. Вместо этого MR содержит кислотный остаток (Glu134) вместо Arg130 и нейтральную боковую цепь Leu146 вместо Arg142, обнаруженную в PETNR (рис. A). Поскольку Arg130 управляет коферментной специфичностью в PETNR, а вариант R130E PETNR не принимает NADPH в качестве донора гидрида, мы предположили, что NADH-специфичность MR может быть приписана присутствию Glu134.Чтобы проверить эту гипотезу, мы создали два варианта MR, E134R и L146R, и охарактеризовали их свойства с помощью спектроскопии остановленного потока. Полученные кинетические параметры представлены на рис. B.
(A) Наложение рентгеновских кристаллических структур тэна: NADH 4 (чирок, апельсиновые палочки, PDB: 3KFT) и MR: NADH 4 комплексов (желтый рисунок, пурпурные палочки, PDB: 2R14), показывающие активный сайт и лоскут β-шпильки. НАДН 4 подтверждение в PDB: 3KFT отображается в виде строки.(B) Кинетические параметры для RHR вариантов MR WT, E134R и L146R с NADH (вверху) и NADPH (внизу). Кинетические параметры представлены в виде столбцов, а столбцы ошибок представляют собой стандартные ошибки аппроксимации. Все кинетические параметры приведены в таблицах S3 и S4.
RHR WT MR с NADH продолжается с k красный = 55,44 ± 0,41 с −1 и K S = 89 ± 4 мкм 53, 57. Предельная скорость реакции E134R и L146R MR с NADH аналогична WT с k красный = 44.64 ± 0,07 и 61,69 ± 0,22 с −1 соответственно. Однако введение аргинина в любой из сайтов приводит к резкому увеличению сродства связывания с NADH, по оценкам, K S значения 6 и 5 ± 1 мкм для E134R и L146R соответственно. Вероятно, это верхний предел из-за экспериментальных ограничений исследования (рис. S7). Опять же, эти результаты согласуются со связыванием кофермента посредством ионных взаимодействий между пирофосфатным фрагментом НАДН и гуанидиновой боковой цепью (ами) остатков аргинина в β-шпильке.Небольшие различия в скоростях передачи H ( k красный ) между вариантами MR можно отнести к незначительным нарушениям никотинамидной составляющей NADH в каждом комплексе Михаэлиса.
Наконец, мы исследовали, может ли НАДФН уменьшить какой-либо из вариантов MR. Хотя ранее сообщалось, что WT MR не реагирует с NADPH 42, мы смогли наблюдать медленную кинетику RHR при очень высоких концентрациях NADPH ( k красный = 0,86 ± 0,15 с −1 , K S = 38.5 ± 12,6 мм). Наряду с этой медленной фазой наблюдалась небольшая быстрая фаза, которую мы связываем с небольшим количеством примеси НАДН (0,05–0,1%) в исходном НАДФН (рис. S8). Реакции E134R и L146R MR с NADPH показывают значительно улучшенную кинетику RHR с эффективностью реакции ( k красный / K S ) в 55 и 20 раз больше, чем для WT MR, соответственно (рис. B). В качестве доработок как в к, так и в красный и K S , улучшенное связывание НАДФН не повлияло на скорость этой реакции.Кроме того, варианты E134R и L146R MR также увеличивают в 10-20 раз тыс. красный / K S для RHR с NADH, соответственно, по сравнению с WT MR. Вместе эти результаты показывают, что введение остатка аргинина в любой из целевых сайтов (Arg130 и Arg142 в PETNR) приводит к улучшенной кинетике RHR в MR.
Это приводит к интригующему вопросу о том, почему PETNR и MR не эволюционировали для более прочного связывания никотинамидных коферментов.Во-первых, скорее всего, не будет сильных эволюционных ограничений для достижения значений K S <100 мкм, так как НАДН часто обнаруживается при концентрациях выше 100 мкм in vivo 58, 59. Во-вторых, сильное связывание NAD (P) H может привести к прочному связыванию продукта NAD (P) + , предотвращая быстрое высвобождение из активного сайта. Это замедлит общую скорость каталитического обмена, поскольку полный цикл ферментативной реакции представляет собой общий одноцентровый механизм пинг-понга. Таким образом, лоскут β-шпильки также может играть роль в связывании окислительного субстрата, и дальнейшее улучшение связывания NAD (P) H может происходить за счет продуктивного связывания окислительного субстрата в активном центре фермента.
Чтобы исследовать этот аспект, мы исследовали кинетику стационарного оборота E134R и L146R MR с NADH и широко используемым субстратом семейства OYE, 2-циклогексен-1-он. Наблюдалась кинетика, аналогичная WT MR 53, 55 (рис. S9), и окислительная полуреакция была ограничивающей скорость во всех случаях. Это открытие демонстрирует, что улучшенное сродство кофермента не обязательно приводит к нарушению кинетики окислительной полуреакции MR. Поскольку варианты MR E134R и L146R обладают повышенным сродством к NADH, а также способностью работать с NADPH, они открывают новые возможности для использования в приложениях биокатализа.
Нам удалось кардинально изменить сродство НАДН-зависимой МР как к НАДН, так и к НАДФН путем изменения конструкции лоскута β-шпильки посредством одноточечного мутагенеза. Основываясь на этих результатах, мы предполагаем, что коферментная специфичность может быть рационально сконструирована у других членов семейства OYE путем нацеливания на большой ход полипептида между цепью β3 и спиралью α3 ствола TIM. Хотя последовательность (и часто структурные элементы) этой петли не является консервативной во всем семействе, высокая степень консервативности / сходства последовательностей фланкирующих областей (в частности, цепи β3 и спирали α3, а также первой и последние четыре остатка элемента петли; рис.) должен позволить сфокусированный подход к переключению специфичности кофермента в других OYE, который также может быть применен при отсутствии кристаллографических данных.
Заключительные замечания
Создание эффективных метаболических путей требует способности контролировать использование ферментативного никотинамидного кофермента, а также конструировать или восстанавливать предпочтение коферментов в оксидоредуктазах, одном из самых больших классов ферментов, часто используемых в биокаталитических процессах. Были предприняты попытки понять и переключить предпочтение коферментов оксидоредуктаз, в особенности для семейства дегидрогеназ 45, 47, 60, 61.Несмотря на то, что они являются мишенями для большого количества биокаталитических процессов 9, 12, отсутствует понимание молекулярных основ специфичности NAD (P) H в OYEs, самой большой группе ферментов в классе енредуктаз оксидоредуктаз.
Мы продемонстрировали, что заряженные остатки в лоскуте β-шпильки двух OYE в значительной степени ответственны за прочное и селективное связывание никотинамидных коферментов в этих енредуктазах. Мы установили, что структурный мотив β-шпильки определяет сродство PETNR к NADPH через электростатические взаимодействия между двумя остатками аргинина (Arg130 и Arg142), а также пирофосфатной и 2′-фосфатной группами кофермента.Проверка консервативных структурных мотивов (не последовательностей) в MR и PETNR идентифицировала два остатка в MR (Glu134 и Leu146), которые контролируют аффинность связывания и селективность кофермента в этом ферменте. Таким образом, конструкция на основе структуры учитывает давние неопределенности, связанные со специфичностью кофермента в OYE. Большинство OYEs имеют сходную петлю, возникающую между цепью β3 и спиралью α3 ствола TIM. Хотя сходство последовательностей может не сохраняться в этой области, подходы, основанные на структуре, как описано в данном документе, должны позволить регулировать сродство к никотинамиду и селективность у других членов семейства OYE.
Экспериментальная часть
Материалы
Все коммерческие реагенты были аналитической чистоты и были приобретены у Sigma-Aldrich (Дорсет, Великобритания), если не указано иное. НАДН и НАДФН были приобретены в Melford Laboratories (Челсворт, Великобритания).
Клонирование, сверхэкспрессия и очистка вариантных ферментов
Пентаэритритолтетранитратредуктаза из Enterobacter Cloacae PB2 и MR из Pseudomonas putida были сверхэкспрессированы из С-концевой плазмы His 6 с меткой клонированных конструкций с меткой pET21.Желаемые мутации вводили в гены PETNR и MR с помощью набора для сайт-направленного мутагенеза Q5 от New England BioLabs (Хитчин, Великобритания) с пользовательскими праймерами, заказанными в Eurofins Genomics (Эберсберг, Германия). Разработанные неперекрывающиеся праймеры, используемые для каждого варианта, представлены в таблице S5. Все мутации были подтверждены секвенированием ДНК (Eurofins Genomics). NiCo21 (DE3) Клетки Escherichia coli использовали для сверхэкспрессии всех вариантных ферментов. Ферменты, помеченные His 6 , были выделены с помощью аффинной хроматографии с использованием заряженных никелем колонок IMAC HisTrap HP от GE Healthcare (Little Chalfont, UK).
Коэффициенты экстинкции
Концентрации НАДН и НАДФН определяли с использованием молярного коэффициента экстинкции 6,22 мм. -1 · см -1 при 340 нм 62. Концентрации ферментов PETNR и MR определялись с использованием молярного коэффициента экстинкции 13,3 мм. -1 · см -1 при 46 нм (то же значение использовалось для всех вариантов фермента, поскольку они имели те же спектральные характеристики в УФ-видимом диапазоне, что и фермент WT, с мутагенезом, не влияющим на характеристические спектры PETNR / MR. Связанный FMN).
Спектроскопия с остановленным потоком
RHR енредуктаз (PETNR и MR) с NADH и NADPH исследовали с помощью спектрофотометра с остановленным потоком Hi-Tech Scientific (TgK Scientific, Bradford on Avon, Великобритания), который имел блок обработки проб, помещенный в анаэробный перчаточный ящик Belle Technology (<5 ppm O 2 ). Все эксперименты проводили в 50 мМ буферном растворе фосфата калия, pH 7,0, который перед экспериментами дегазировали, как описано ранее 49.Все измерения концентрационной зависимости проводились при 25 ° C с использованием фермента 20 мкм (конечная концентрация, после смешивания двух растворов реагентов) и различных концентраций НАДФН или НАДН (7–12 различных концентраций для каждого эксперимента с концентрационной зависимостью, конечная концентрация 0,1–25 мм). концентрация кофермента). Восстановление FMN наблюдали путем непрерывного мониторинга уменьшения поглощения при 465 нм (максимальный пик для окисленного фермента, связанного с флавином, одинаковый как для PETNR, так и для MR). Все переходные кинетические следы были проанализированы и снабжены стандартными функциями экспоненциального затухания первого, второго или третьего порядка (в зависимости от количества наблюдаемых фаз) с использованием originpro 9.1 (OriginLab Corporation, Массачусетс, США). Зарегистрированные наблюдаемые константы скорости ( k obs ) представляют собой среднее значение от трех до шести отдельных измерений, с полосами ошибок, нанесенными на график как ± 1 стандартное отклонение. Предельная константа скорости ( k красный ) и кажущуюся константу насыщения ( K S ) для RHR каждого варианта с NAD (P) H были определены путем подбора k obs значений при изменении концентрации кофермента до гиперболической функции (уравнение.1).
Кинетика устойчивого состояния
Восстановление 2-циклогексен-1-она с использованием вариантов MR сопровождалось мониторингом окисления NADH (отмеченного снижением оптической плотности при 340 нм). Все измерения проводили при 25 ° C в 50 мМ буферном растворе фосфата калия, pH 7,0, с использованием насыщающей концентрации НАДН (200 мкМ). Все эксперименты проводились в анаэробных условиях с использованием спектрофотометра с остановленным потоком Hi-Tech Scientific путем смешивания раствора реагента, состоящего из 0.2 мкм фермента и 150 мкм НАДН (приготовленный до перемешивания с остановленным потоком) с раствором реагента, содержащим переменные концентрации (0,5–50 мм) 2-циклогексен-1-она. Все растворы реагентов 2-циклогексен-1-она были свежеприготовлены непосредственно перед использованием, и для каждой концентрации субстрата регистрировали от трех до шести следов. Все переходные кинетические трассы были подогнаны к стандартной линейной функции с использованием OriginPro 9.1. Максимальная скорость ( В max ) и постоянной Михаэлиса ( K M ) были определены путем подгонки начальных скоростей реакции при различных концентрациях 2-циклогексен-1-она к уравнению Михаэлиса-Ментен (уравнение.2).
V0 = Vmax2-cyclohexen-1-oneKM + 2-cyclohexen-1-one
(2)
Множественное выравнивание последовательностей
Множественное выравнивание последовательностей было выполнено с использованием веб-сервера Clustal Omega 63, и файл выравнивания был визуализирован с использованием сервера ENDscript 64.
Общие сведения о Earnest Money — что это такое и как это работает
Независимо от того, покупаете ли вы дом впервые или прошло много времени с тех пор, как вы купили последний дом, некоторые термины, связанные с недвижимостью, могут вас сбить с толку.После того, как охота за домом наконец-то привела вас к поиску дома своей мечты, самое время начать процесс покупки. Один из первых шагов — сделать предложение на дом, которое часто сопровождается задатком.
Что такое задаток?
Проще говоря, задаток — это «добросовестный» депозит. По определению серьезный означает серьезный или искренний. В сфере недвижимости включение задатка вместе с предложением показывает продавцу, что вы серьезно относитесь к покупке дома.Включение задатка в предложение не является обязательным, но может быть очень полезным, особенно если в доме есть несколько предложений. При рассмотрении нескольких предложений продавец обычно игнорирует предложение, которое не сопровождается задатком.
Сколько нужно?
Это может варьироваться в зависимости от рыночных условий, местоположения и других факторов. Хотя это не требуется по закону в Нью-Джерси, задаток — это двухэтапный процесс в штате. Меньший депозит будет сопровождать первоначальное предложение, обычно около 1000 долларов.После того, как предложение принято, при подписании договора купли-продажи вносится более крупный депозит, обычно 10% от покупной цены. Опытный риэлтор сможет посоветовать вам, что подходит для текущего рынка и района, в котором находится дом.
Что происходит с деньгами?
Когда делается первоначальное предложение, задаток остается у нейтральной третьей стороны. Этой стороной обычно является поверенный покупателя, брокер по недвижимости или агент условного депонирования.Если предложение не принято, деньги возвращаются покупателю. Если предложение принято, задаток хранится на условном депонировании до закрытия, когда он будет применен к цене покупки.
Возвращается ли задаток, если покупатель отказывается?
Это варьируется от штата к штату, а также может зависеть от конкретного соглашения между покупателем и продавцом. Вот три обстоятельства, при которых покупатель может отступить в Нью-Джерси и при этом получить обратно свои задатки.
Проверка поверенным — после того, как покупатель и продавец подписали договор купли-продажи, обе стороны имеют право на рассмотрение договора их потенциальными поверенными.В течение периода проверки адвокатом любая из сторон может принять решение об отказе по любой причине. Покупатель может просто решить, что он больше не заинтересован в покупке дома. Тем временем продавец может получить более выгодное предложение и больше не желает принимать ранее согласованное предложение. В любом случае договор может быть расторгнут, а задаток будет возвращен покупателю.
Результаты осмотра — Покупатель имеет право провести осмотр дома перед тем, как приступить к покупке.Стандартный отчет домашнего инспектора будет охватывать состояние крыши, фундамента, подвала, стен, потолков, полов, окон, дверей и чердака дома, включая любую видимую изоляцию. Он также будет включать проверку системы отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха, внутренней сантехники и электрических систем. Также могут проводиться проверки на наличие термитов, плесени, радона и краски на основе свинца. После завершения всех проверок покупатель может решить, что продавец должен решить любые проблемы, которые мог обнаружить инспектор.Если продавец откажется, покупатель может отказаться от продажи с задатком.
Получение обязательства по ипотеке — В договоре купли-продажи есть раздел, который называется «Условия непредвиденных расходов по ипотеке». Непредвиденные обстоятельства — это условия или действия, которые должны быть выполнены, чтобы договор недвижимости стал обязательным. Они могут варьироваться в зависимости от деталей вашего конкретного соглашения, но есть одно стандартное непредвиденное обстоятельство — обязательство по ипотеке. Это означает, что покупатель получит определенное обязательство по ипотеке к определенной дате.Если они этого не сделают, любая из сторон может расторгнуть договор, и покупателю вернут задаток.
Имейте в виду, хотя вы можете вернуть свои деньги, если не можете прийти к соглашению по пунктам, описанным выше, но если покупатель действовал недобросовестно и считается нарушившим договор, продавец может отвезти вас к суд о взыскании убытков. Всегда полезно проконсультироваться со своим адвокатом, прежде чем отказываться от договора о недвижимости.
Специалисты по недвижимости
При покупке или продаже дома вы всегда должны сотрудничать с агентством недвижимости, имеющим опыт и имеющим прочную репутацию в вашем регионе.На LBI в Нью-Джерси этим агентством недвижимости является The Freeman Group. За последние 20 лет мы заработали заслуженную репутацию ведущей компании по недвижимости на острове Лонг-Бич. Наша команда завершила сотни успешных сделок, зарекомендовав себя самыми продуктивными и ориентированными на результат риелторами в Оушен Каунти. Если вы заинтересованы в покупке, продаже или инвестировании в недвижимость на Джерси-Шор, свяжитесь с нами сегодня.
МетаболизмNAD + и его роль в клеточных процессах при старении
Сахар С., Нин В., Барбоза М. Т., Чини Э. Н. и Сассоне-Корси П. Измененные поведенческие и метаболические циркадные ритмы у мышей с нарушенными колебаниями NAD + . Старение 3 , 794–802 (2011).
PubMed PubMed Central Google ученый
Cambronne, X. A. & Kraus, W. L. Местоположение, местоположение, местоположение: компартментализация синтеза и функций НАД в клетках млекопитающих. Trends Biochem. Sci. 45 , 858–873 (2020).
PubMed Google ученый
Verdin, E. NAD + в старении, метаболизме и нейродегенерации. Наука 350 , 1208–1213 (2015).
CAS PubMed Google ученый
Cambronne, X.A. et al. Биосенсор обнаруживает несколько источников митохондриального NAD + . Наука 352 , 1474–1477 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Liu, L. et al. Количественный анализ потоков синтеза-распада НАД. Cell Metab. 27 , 1067–1080.e5 (2018). Это исследование демонстрирует, что потоки распада синтеза NAD + сильно различаются в разных тканях, что свидетельствует о тканеспецифическом метаболизме NAD + .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Minhas, P. S. et al. Синтез макрофагов de novo NAD определяет иммунную функцию при старении и воспалении. Нат. Иммунол. 20 , 50–63 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Каррико, К., Мейер, Дж. Г., Хе, В., Гибсон, Б. В. и Вердин, Э. Возникает митохондриальный ацилом: протеомика, регуляция сиртуинами, метаболические последствия и последствия заболеваний. Cell Metab. 27 , 497–512 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Masri, S. et al. Разделение циркадной транскрипции с помощью SIRT6 ведет к сегрегированному контролю клеточного метаболизма. Cell 158 , 659–672 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Cantó, C.и другие. Взаимозависимость AMPK и SIRT1 для метаболической адаптации скелетных мышц к голоданию и упражнениям. Cell Metab. 11 , 213–219 (2010).
PubMed PubMed Central Google ученый
Ramsey, K. M. et al. Цикл обратной связи циркадных часов посредством NAMPT-опосредованного биосинтеза NAD + . Наука 324 , 651–654 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Накахата, Ю., Сахар, С., Астарита, Г., Калузова, М., Сассоне-Корси, П. Циркадный контроль пути спасения NAD + с помощью CLOCK-SIRT1. Наука 324 , 654–657 (2009). Это исследование демонстрирует, что внутриклеточные уровни NAD + регулируются основным циркадным регулятором CLOCK – BMAL1 посредством модуляции экспрессии NAMPT .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Имаи, С., Армстронг, К. М., Кеберлейн, М. и Гуаренте, Л. Белок транскрипционного молчания и долголетия Sir2 представляет собой НАД-зависимую гистоновую деацетилазу. Nature 403 , 795–800 (2000). Это исследование является первым, демонстрирующим, что функция сиртуина зависит от NAD + .
CAS Google ученый
Фельдман, Дж. Л., Баеза, Дж. И Дену, Дж. М. Активация протеиндеацетилазы SIRT6 длинноцепочечными жирными кислотами и широко распространенное деацилирование сиртуинами млекопитающих. J. Biol. Chem. 288 , 31350–31356 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Jiang, H. et al. SIRT6 регулирует секрецию TNF-α посредством гидролиза длинноцепочечного жирного ациллизина. Природа 496 , 110–113 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
He, W., Ньюман, Дж. К., Ван, М. З., Хо, Л. и Вердин, Э. Митохондриальные сиртуины: регуляторы ацилирования и метаболизма белков. Trends Endocrinol. Метаб. 23 , 467–476 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Чоудхари, К., Вайнерт, Б. Т., Нишида, Ю., Вердин, Э. и Манн, М. Растущий ландшафт ацетилирования лизина связывает метаболизм и передачу сигналов клеток. Нат. Rev. Mol. Cell Biol. 15 , 536–550 (2014).
CAS PubMed Google ученый
Haigis, M.C. et al. SIRT4 ингибирует глутаматдегидрогеназу и противодействует эффектам ограничения калорий в бета-клетках поджелудочной железы. Cell 126 , 941–954 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Лист, Г., Форд, Э., Куртев, М., Гуаренте, Л.Гомолог Sir2 мыши SIRT6 представляет собой ядерную АДФ-рибозилтрансферазу. J. Biol. Chem. 280 , 21313–21320 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Amat, R. et al. SIRT1 контролирует транскрипцию гена коактиватора-1α рецептора-γ, активируемого пролифератором пероксисом (PGC-1α), в скелетных мышцах через ауторегуляторную петлю PGC-1α и взаимодействие с MyoD. J. Biol. Chem. 284 , 21872–21880 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Nemoto, S., Fergusson, M. & Finkel, T. SIRT1 функционально взаимодействует с метаболическим регулятором и коактиватором транскрипции PGC-1α. J. Biol. Chem. 280 , 16456–16460 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Гурд, Б. Дж. Деацетилирование PGC-1α с помощью SIRT1: важность для функции скелетных мышц и индуцированного физической нагрузкой митохондриального биогенеза. Заявл. Physiol. Nutr. Метаб. 36 , 589–597 (2011).
CAS PubMed Google ученый
Kang, H. T. & Hwang, E. S. Никотинамид улучшает качество митохондрий за счет активации аутофагии в клетках человека. Ячейка старения 8 , 426–438 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Jang, S.-Y., Kang, H. T. & Hwang, E. S. Митофагия, индуцированная никотинамидом: событие, опосредованное высоким соотношением NAD + / NADH и активацией белка SIRT1. J. Biol. Chem. 287 , 19304–19314 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Хоттигер, М. О., Хасса, П. О., Люшер, Б., Шулер, Х. и Кох-Нолте, Ф. К единой номенклатуре АДФ-рибозилтрансфераз млекопитающих. Trends Biochem.Sci. 35 , 208–219 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Бай П. и Канто С. Роль ферментов PARP-1 и PARP-2 в регуляции метаболизма и заболеваниях. Cell Metab. 16 , 290–295 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Oliver, A. W. et al. Кристаллическая структура каталитического фрагмента мышиной поли (АДФ-рибозы) полимеразы-2. Nucleic Acids Res. 32 , 456–464 (2004).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Boehler, C. et al. Поли (АДФ-рибоза) полимераза 3 (PARP3), новичок в клеточном ответе на повреждение ДНК и митотическую прогрессию. Proc. Natl Acad. Sci. США 108 , 2783–2788 (2011).
CAS PubMed Google ученый
Beck, C., Robert, I., Reina-San-Martin, B., Schreiber, V. и Dantzer, F. Поли (АДФ-рибоза) полимеразы в репарации двухцепочечных разрывов: внимание к PARP1, PARP2 и PARP3 . Exp. Клетка. Res. 329 , 18–25 (2014).
CAS PubMed Google ученый
Хубер, А., Бай, П., де Мурсия, Дж. М. и де Мерсия, Г. PARP-1, PARP-2 и ATM в ответе на повреждение ДНК: функциональная синергия в развитии мышей. Ремонт ДНК. 3 , 1103–1108 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Рэй Чаудхури, А. и Нуссенцвейг, А. Многогранная роль PARP1 в репарации ДНК и ремоделировании хроматина. Нат. Rev. Mol. Cell Biol. 18 , 610–621 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Бай, П.и другие. Ингибирование PARP-1 увеличивает метаболизм митохондрий за счет активации SIRT1. Cell Metab. 13 , 461–468 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Pirinen, E. et al. Фармакологическое ингибирование полимераз поли (АДФ-рибозы) улучшает физическую форму и функцию митохондрий в скелетных мышцах. Cell Metab. 19 , 1034–1041 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Scheibye-Knudsen, M. et al. Диета с высоким содержанием жиров и NAD + активируют Sirt1, чтобы спасти преждевременное старение при синдроме Кокейна. Cell Metab. 20 , 840–855 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Cantó, C., Sauve, A. & Bai, P. Перекрестные помехи между поли (АДФ-рибозой) полимеразой и ферментами сиртуина. Мол. Asp. Med. 34 , 1168–1201 (2013).
Google ученый
Gui, B. et al. Селективное нацеливание PARP-2 ингибирует передачу сигналов рецептора андрогена и рост рака простаты за счет нарушения функции FOXA1. Proc. Natl Acad. Sci. США 116 , 14573–14582 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Bai, P. et al. PARP-2 регулирует экспрессию SIRT1 и расход энергии всем телом. Cell Metab. 13 , 450–460 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Liu, Q., Kriksunov, I. A., Hao, Q., Graeff, R. & Lee, H. C. Кислотные остатки в активных центрах CD38 и ADP-рибозилциклазы определяют активность синтеза и гидролиза NAAPD. J. Biol. Chem. https://doi.org/10.2210/pdb2hct/pdb (2006).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Эрнст, И. М., Флигерт, Р. и Гуз, А. Х. Аденин-динуклеотидные вторичные мессенджеры и кальциевая передача сигналов Т-лимфоцитов. Перед. Иммунол. 4 , 259 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Yu P. et al. Прямое управление каналом TRPM2 с помощью cADPR посредством специфических взаимодействий с карманом связывания ADPR. Cell Rep. 27 , 3684–3695.e4 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Мао С. Архитектура канала TRPM2 человека. Наука 362 , 1372.12–1374 (2018).
Google ученый
Torti, M., Bertoni, A., Canobbio, I., Sinigaglia, F. & Balduini, C. Гидролиз НАДФ CD38 тромбоцитов в отсутствие синтеза и разложения циклической АДФ-рибозы 2 ‘ -фосфат. FEBS Lett. 455 , 359–363 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Camacho-Pereira, J. et al. CD38 диктует возрастное снижение НАД и митохондриальную дисфункцию через SIRT3-зависимый механизм. Cell Metab. 23 , 1127–1139 (2016). Это исследование демонстрирует, что экспрессия CD38 увеличивается во многих тканях во время старения и что CD38 является основной НАДазой, участвующей в связанном со старением тканевом снижении уровня НАД + уровней .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Aomatsu, E. et al. Новая ось SCRG1 / BST1 регулирует потенциал самообновления, миграции и остеогенной дифференцировки в мезенхимальных стволовых клетках. Sci. Отчет 4 , 3652 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Preugschat, F. et al. Предварительный и стационарный кинетический анализ N-рибозилгидролазной активности hCD157. Arch. Biochem. Биофиз. 564 , 156–163 (2014).
CAS PubMed Google ученый
Covarrubias, A.J. et al. Старые клетки способствуют снижению тканевого NAD + во время старения за счет активации макрофагов CD38 + . Нат. Метаб. 2 , 1265–1283 (2020).
CAS PubMed Google ученый
Ортолан, Э., Аугери, С., Фиссоло, Г., Муссо, И., Фунаро, А. CD157: от иммунорегуляторного белка к потенциальной терапевтической мишени. Immunol. Lett. 205 , 59–64 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Рейнхерц, Э. Л., Кунг, П. К., Гольдштейн, Г., Леви, Р. Х. и Шлоссман, С. Ф. Дискретные стадии интратимической дифференцировки человека: анализ нормальных тимоцитов и лейкемических лимфобластов Т-клеточного происхождения. Proc. Natl Acad. Sci. США 77 , 1588–1592 (1980).
CAS PubMed Google ученый
Шубинский Г. и Шлезингер М. Маркер дифференцировки лимфоцитов CD38: новое понимание его эктоферментной активности и его роли в качестве преобразователя сигналов. Иммунитет 7 , 315–324 (1997).
CAS PubMed Google ученый
Тодд, Р. Ф. 3-й, Роуч, Дж. А. и Арнаут, М. А. Модулированная экспрессия Мо5, антигена миеломоноцитарной плазматической мембраны человека. Кровь 65 , 964–973 (1985).
PubMed Google ученый
Quarona, V. et al. CD38 и CD157: долгий путь от маркеров активации до многофункциональных молекул. Cytometry B Clin. Cytom. 84 , 207–217 (2013).
PubMed Google ученый
Deaglio, S. et al. Человеческий CD38 (АДФ-рибозилциклаза) является противорецептором CD31, члена суперсемейства Ig. J. Immunol. 160 , 395–402 (1998).
CAS PubMed Google ученый
Deaglio, S. et al. CD38 человека и его лиганд CD31 определяют уникальный путь передачи сигналов Т-лимфоцитов собственной пластинки. FASEB J. 15 , 580–582 (2001).
CAS PubMed Google ученый
Vallario, A. et al. Клетки миеломы человека экспрессируют лиганд CD38 CD31. Br. J. Haematol. 105 , 441–444 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Deaglio, S. et al. Взаимодействия CD38 / CD31 активируют генетические пути, ведущие к пролиферации и миграции клеток хронического лимфоцитарного лейкоза. Мол. Med. 16 , 87–91 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Partida-Sánchez, S. et al. Циклическое производство АДФ-рибозы с помощью CD38 регулирует высвобождение внутриклеточного кальция, приток внеклеточного кальция и хемотаксис нейтрофилов и требуется для бактериального клиренса in vivo. Нат. Med. 7 , 1209–1216 (2001).
PubMed Google ученый
Matalonga, J. et al. Ядерный рецептор LXR ограничивает бактериальную инфекцию макрофагов хозяина посредством механизма, который влияет на клеточный метаболизм NAD. Cell Rep. 18 , 1241–1255 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Хоган, К. А., Чини, С. С. и Чини, Е. Н. Многогранный эктофермент CD38: роли в иммуномодуляции, раке, старении и метаболических заболеваниях. Перед. Иммунол. 10 , 1187 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Funaro, A. et al. CD157 является важным медиатором адгезии и миграции нейтрофилов. Кровь 104 , 4269–4278 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Essuman, K. et al. Домен рецептора SARM1 Toll / интерлейкин-1 обладает внутренней активностью расщепления НАД, которая способствует патологической дегенерации аксонов. Нейрон 93 , 1334–1343.e5 (2017). Это исследование демонстрирует, что SARM1 обладает как гликогидролазной активностью NAD + , так и циклазной активностью, проясняя ключевую роль этого фермента в истощении NAD + во время валлеровской дегенерации .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gerdts, J., Brace, E.J., Sasaki, Y., DiAntonio, A. & Milbrandt, J. Активация SARM1 локально запускает дегенерацию аксонов через разрушение NAD. Наука 348 , 453–457 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Wang, Q. et al. Sarm1 / Myd88-5 регулирует внутренний иммунный ответ нейронов на травматические повреждения аксонов. Cell Rep. 23 , 716–724 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Лин, К.-В., Чен, С.-Й., Ченг, С.-Дж., Ху, Х.-Т. & Hsueh, Y.-P. Дефицит Sarm1 нарушает синаптическую функцию и ведет к поведенческому дефициту, который можно улучшить с помощью аллостерического модулятора mGluR. Перед. Клетка. Neurosci. 8 , 87 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Carty, M. et al. Человеческий адаптер SARM негативно регулирует передачу сигналов TRIF-зависимого Toll-подобного рецептора адапторного белка. Нат. Иммунол. 7 , 1074–1081 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Panneerselvam, P. et al. Гибель Т-клеток после активации иммунной системы опосредуется SARM, локализованным в митохондриях. Cell Death Differ. 20 , 478–489 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Zhao, Z. Y. et al. Проникающий в клетки миметик NMN активирует SARM1, чтобы производить циклическую АДФ-рибозу и вызывать неапоптотическую гибель клеток. iScience 15 , 452–466 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gürtler, C. et al. SARM регулирует продукцию CCL5 в макрофагах, способствуя привлечению факторов транскрипции и РНК-полимеразы II к промотору Ccl5. Дж.Иммунол. 192 , 4821–4832 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Uccellini, M. B. et al. Пассажирские мутации смешивают фенотипы мышей с дефицитом SARM1. Cell Rep. 31 , 107498 (2020).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Лаутруп С., Синклер Д. А., Маттсон М.П. и Фанг, Э. Ф. НАД при старении мозга и нейродегенеративных расстройствах. Cell Metab. 30 , 630–655 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Хруби, А. и Ху, Ф. Б. Эпидемиология ожирения: общая картина. Фармакоэкономика 33 , 673–689 (2015).
PubMed PubMed Central Google ученый
Пи-Суньер, X. Медицинские риски ожирения. Аспирантура. Med. 121 , 21–33 (2009).
PubMed PubMed Central Google ученый
Salvestrini, V., Sell, C. & Lorenzini, A. Ожирение может ускорить процесс старения. Перед. Эндокринол. 10 , 266 (2019).
Google ученый
Кацюба, Е., Романи, М., Хофер, Д. и Ауверкс, Дж. NAD + гомеостаз в здоровье и болезни. Нат. Метаб. 2 , 9–31 (2020).
CAS PubMed Google ученый
Landry, J. et al. Белок сайленсинга SIR2 и его гомологи представляют собой НАД-зависимые протеиндеацетилазы. Proc. Natl Acad. Sci. США 97 , 5807–5811 (2000).
CAS PubMed Google ученый
Smith, J. S. et al. Филогенетически консервативная активность NAD + -зависимой протеиндеацетилазы в семействе белков Sir2. Proc. Natl Acad. Sci. США 97 , 6658–6663 (2000).
CAS PubMed Google ученый
Фукуватари, Т., Шибата, К., Исихара, К., Фушики, Т. и Сугимото, Е. Повышение уровня НАД в крови после умеренных упражнений у молодых женщин и мышей. J. Nutr.Sci. Витаминол. 47 , 177–179 (2001).
CAS PubMed Google ученый
de Guia, R.M. et al. Аэробные тренировки и тренировки с отягощениями обращают вспять возрастное снижение способности к спасению НАД в скелетных мышцах человека. Physiol. Отчет 7 , e14139 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Cantó, C. et al. AMPK регулирует расход энергии, модулируя метаболизм NAD и активность SIRT1. Nature 458 , 1056–1060 (2009).
PubMed PubMed Central Google ученый
Mitchell, S.J. et al. Влияние секса, напряжения и потребления энергии на признаки старения у мышей. Cell Metab. 23 , 1093–1112 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Эламин, М., Раскин, Д. Н., Масино, С. А. и Саккетти, П. Кетогенная диета модулирует НАД-зависимые ферменты и снижает повреждение ДНК в гиппокампе. Перед. Клетка. Neurosci. 12 , 263 (2018).
PubMed PubMed Central Google ученый
Levine, D. C. et al. НАД контролирует циркадное перепрограммирование посредством ядерной транслокации PER2 для противодействия старению. Мол. Ячейка 78 , 835–849.e7 (2020).
CAS PubMed Google ученый
Cantó, C. et al. Никотинамид рибозид, предшественник НАД (+), усиливает окислительный метаболизм и защищает от ожирения, вызванного диетой с высоким содержанием жиров. Cell Metab. 15 , 838–847 (2012).
PubMed PubMed Central Google ученый
Йошино, Дж., Миллс, К. Ф., Юн, М. Дж. И Имаи, С.-Я. Никотинамидмононуклеотид, ключевой промежуточный продукт NAD, лечит патофизиологию диабета, вызванного диетой и возрастом у мышей. Cell Metab. 14 , 528–536 (2011). Это исследование демонстрирует, что экспрессия NAMPT может подавляться при воспалительных процессах, таких как старение и ожирение .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Ear, P.H. et al. Никотинамид рибозид по материнской линии способствует послеродовой потере веса, развитию потомства и нейрогенезу взрослого потомства. Cell Rep. 26 , 969–983.e4 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Goodman, R.P. et al. Редукционный стресс NADH в печени лежит в основе общих изменений метаболических характеристик. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-020-2337-2 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Хиршей, М.D. et al. SIRT3 регулирует митохондриальное окисление жирных кислот путем обратимого деацетилирования ферментов. Nature 464 , 121–125 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hirschey, M. D. et al. Дефицит SIRT3 и гиперацетилирование митохондриального белка ускоряют развитие метаболического синдрома. Мол. Ячейка 44 , 177–190 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lagouge, M. et al. Ресвератрол улучшает функцию митохондрий и защищает от метаболических нарушений, активируя SIRT1 и PGC-1alpha. Cell 127 , 1109–1122 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Pfluger, P. T., Herranz, D., Velasco-Miguel, S., Serrano, M. & Tschöp, M. H. Sirt1 защищает от метаболических нарушений, вызванных диетой с высоким содержанием жиров. Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 9793–9798 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Barbosa, M. T. P. et al. Фермент CD38 (NAD-гликогидролаза, EC 3.2.2.5) необходим для развития ожирения, вызванного диетой. FASEB J. 21 , 3629–3639 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Санто, М. и Бай, П. Роль метаболизма АДФ-рибозы в регуляции метаболизма, дифференцировке жировой ткани и метаболизме. Genes Dev. 34 , 321–340 (2020).
PubMed PubMed Central Google ученый
Tarragó, M. G. et al. Мощный и специфический ингибитор CD38 улучшает возрастную метаболическую дисфункцию, обращая вспять снижение НАД в тканях. Cell Metab. 27 , 1081–1095.e10 (2018). Это исследование демонстрирует, что фармакологическое ингибирование CD38 обращает вспять возрастное снижение уровня NAD + , улучшая некоторые физиологические и метаболические характеристики .
PubMed PubMed Central Google ученый
Stromsdorfer, K. L. et al. NAMPT-опосредованный биосинтез NAD + в адипоцитах регулирует функцию жировой ткани и мультиорганную чувствительность к инсулину у мышей. Cell Rep. 16 , 1851–1860 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Dollerup, O.L. et al. Влияние никотинамида рибозида на эндокринную функцию поджелудочной железы и инкретиновые гормоны у недиабетических мужчин с ожирением. J. Clin. Эндокринол. Метаб. 104 , 5703–5714 (2019).
PubMed Google ученый
Remie, C.M.E. et al. Добавка никотинамид-рибозида изменяет состав тела и концентрацию ацетилкарнитина в скелетных мышцах у здоровых людей с ожирением. Am. J. Clin. Nutr. https://doi.org/10.1093/ajcn/nqaa072 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Франчески, К., Гарагнани, П., Парини, П., Джулиани, С. и Санторо, А. Воспаление: новая иммуно-метаболическая точка зрения на возрастные заболевания. Нат. Rev. Endocrinol. 14 , 576–590 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Хотамислигил, Г.С. Воспаление, метафоспаление и иммунометаболические нарушения. Природа 542 , 177–185 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Furman, D. et al. Хроническое воспаление в этиологии заболеваний на протяжении всей жизни. Нат. Med. 25 , 1822–1832 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Оиши Ю. и Манабе И. Макрофаги при возрастных хронических воспалительных заболеваниях. NPJ Aging Mech. Дис. 2 , 16018 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
van Beek, A. A., Van den Bossche, J., Mastroberardino, P. G., de Winther, M. P. J. и Leenen, P. J. M. Метаболические изменения в стареющих макрофагах: ингредиенты для воспалительного процесса? Trends Immunol. 40 , 113–127 (2019).
PubMed Google ученый
Van Gool, F. et al. Уровни внутриклеточного НАД регулируют синтез белка фактора некроза опухоли сиртуин-зависимым образом. Нат. Med. 15 , 206–210 (2009). Это исследование является одним из первых, демонстрирующих, что уровни NAD + могут влиять на функцию клеток врожденного иммунитета .
PubMed PubMed Central Google ученый
Venter, G. et al. NAMPT-опосредованный спасительный синтез NAD + контролирует морфофункциональные изменения макрофагов. PLoS ONE 9 , e97378 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Cameron, A. M. et al. Зависимость воспалительных макрофагов от спасения НАД является следствием повреждения ДНК, опосредованного реактивными формами кислорода. Нат. Иммунол. 20 , 420–432 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Regdon, Z. et al. LPS защищает макрофаги от AIF-независимых партанатов путем подавления экспрессии PARP1, индукции экспрессии SOD2 и метаболического перехода к аэробному гликолизу. Free Radic. Биол. Med. 131 , 184–196 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Вираг, Л., Хаэн, Р. И., Реддон, З., Боска, Л. и Прието, П. Самозащита макрофагов от окислительного повреждения: борьба за собственное выживание. Редокс Биол. 26 , 101261 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Chini, C. C. S. et al. Эктофермент CD38 в иммунных клетках индуцируется во время старения и регулирует уровни NAD + и NMN. Нат. Метаб . 2 , 1284–1304 (2020). Это исследование вместе с Covarrubias et al. (2020), продемонстрировали, что нагрузка стареющих клеток связана со снижением уровня NAD + в тканях через иммунные клетки CD38 + .
CAS PubMed Google ученый
Chini, C. et al. НАДаза CD38 индуцируется факторами, секретируемыми стареющими клетками, обеспечивая потенциальную связь между старением и возрастным снижением клеточного НАД. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 513 , 486–493 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Йом, Ю.-Х. и другие. Каноническая инфламмасома Nlrp3 связывает системное воспаление низкой степени с функциональным снижением при старении. Cell Metab. 18 , 519–532 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Tabula Muris Consortium et al. Одноклеточная транскриптомика 20 органов мыши создает Tabula Muris. Nature 562 , 367–372 (2018). Это сборник транскриптомных данных отдельных клеток, который включает более 100 000 клеток из 20 органов и тканей мыши .
Google ученый
Патрия, П., Луис, Т. Л. и Варнер, Дж. А. Нацеливание на ассоциированные с опухолью макрофаги при раке. Trends Immunol. 40 , 310–327 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Adriouch, S., Haag, F., Boyer, O., Seman, M. & Koch-Nolte, F. Внеклеточный NAD: сигнал опасности, препятствующий регуляторным Т-клеткам. Microbes Infect. 14 , 1284–1292 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Hubert, S. et al. Внеклеточный NAD + формирует компартмент регуляторных Т-клеток Foxp3 + посредством пути ART2-P2X7. J. Exp. Med. 207 , 2561–2568 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Tullius, S. G. et al. НАД защищает от EAE, регулируя дифференцировку CD4 Т-клеток. Нат. Commun. 5 , 5101 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Elkhal, A. et al. НАД регулирует судьбу Treg-клеток и способствует выживанию аллотрансплантата за счет системной продукции IL-10, которая не зависит от CD4 CD25 Foxp3 Т-клеток. Sci. Отчет 6 , 22325 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Fagnoni, F. F. et al. Экспансия цитотоксических CD8 + CD28- Т-клеток у здоровых стареющих людей, включая долгожителей. Иммунология 88 , 501–507 (1996).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Weng, N.-P., Akbar, A. N. & Goronzy, J. CD28 — Т-клетки: их роль в возрастном снижении иммунной функции. Trends Immunol. 30 , 306–312 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Jeng, M. Y. et al. Метаболическое перепрограммирование Т-клеток памяти CD8 человека через потерю SIRT1. J. Exp. Med. 215 , 51–62 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Chatterjee, S.и другие. Ось CD38-NAD + регулирует иммунотерапевтический противоопухолевый Т-клеточный ответ. Cell Metab. 27 , 85–100.e8 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Ли, К.-А. и другие. Характеристика связанных с возрастом истощенных Т-клеток CD8 + , определяемых повышенной экспрессией Tim-3 и PD-1. Ячейка старения 15 , 291–300 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Шимада, Ю., Хаяси, М., Нагасака, Ю., Оно-Ивашита, Ю. и Иномата, М. Возрастное усиление негативного костимулирующего рецептора PD-1 в CD4 + Т-клетках мыши. Exp. Геронтол. 44 , 517–522 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Xin Yu, J. et al. Тенденции клинической разработки ингибиторов PD-1 / PD-L1. Нат. Rev. Drug Discov. 19 , 163–164 (2020).
PubMed Google ученый
Akinleye, A. & Rasool, Z. Ингибиторы иммунных контрольных точек PD-L1 в качестве противораковых средств. J. Hematol. Онкол. 12 , 92 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Lages, CS, Lewkowich, I., Sproles, A., Wills-Karp, M. & Chougnet, C. Частичное восстановление функции Т-клеток у старых мышей путем блокады PD-1 in vitro / Путь PD-L1. Ячейка старения 9 , 785–798 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Verma, V. et al. Блокада PD-1 в субпримированных клетках CD8 вызывает дисфункциональные клетки PD-1CD38 и устойчивость к PD-1. Нат. Иммунол. 20 , 1231–1243 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Chen, L. et al. CD38-опосредованная иммуносупрессия как механизм ухода опухолевых клеток от блокады PD-1 / PD-L1. Рак Discov. 8 , 1156–1175 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Coppé, J.-P. и другие. Секреторные фенотипы, связанные со старением, выявляют неавтономные для клеток функции онкогенного RAS и опухолевого супрессора p53. PLoS Biol. 6 , 2853–2868 (2008).
PubMed Google ученый
Basisty, N. et al. Протеомный атлас секретомов, связанных со старением, для развития биомаркеров старения. PLoS Biol. 18 , e3000599 (2020). В этой статье представлена обширная протеомная база данных растворимых белков и экзосомальных факторов SASP, происходящих от нескольких индукторов старения и типов клеток .
PubMed PubMed Central Google ученый
Киркланд, Дж. Л., Чкония, Т., Чжу, Ю., Нидернхофер, Л. Дж. И Роббинс, П. Д. Клинический потенциал сенолитических препаратов. J. Am. Гериатр. Soc. 65 , 2297–2301 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Bussian, T. J. et al. Удаление стареющих глиальных клеток предотвращает тау-зависимую патологию и снижение когнитивных функций. Nature 562 , 578–582 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Чайлдс, Б. Г. и др. Стареющие клетки: новая мишень для болезней старения. Нат. Rev. Drug Discov. 16 , 718–735 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Йошино, Дж., Баур, Дж. А. и Имаи, С.-И. Промежуточные продукты НАД: биология и терапевтический потенциал NMN и NR. Cell Metab. 27 , 513–528 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Nacarelli, T. et al. Метаболизм NAD управляет секретомом, связанным с провоспалительным старением. Нат. Cell Biol. 21 , 397–407 (2019). Эта статья демонстрирует, что путь спасения NAD + активируется во время клеточного старения и регулирует экспрессию воспалительных генов SASP .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Desdín-Micó, G. et al. Т-клетки с дисфункциональными митохондриями вызывают мультиморбидность и преждевременное старение. Наука https://doi.org/10.1126/science.aax0860 (2020).
Артикул PubMed Google ученый
Zhu, X.-H., Lu, M., Lee, B.-Y., Ugurbil, K. & Chen, W. Анализ NAD in vivo выявляет внутриклеточное содержание NAD и окислительно-восстановительное состояние у здоровых людей. мозг человека и их возрастные зависимости. Proc.Natl Acad. Sci. 112 , 2876–2881 (2015).
CAS PubMed Google ученый
Fang, E. F. et al. Нарушение митофагии в XPA из-за гиперактивации PARP-1 и восстановления NAD + / SIRT1. Cell 157 , 882–896 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Fang, E. F. et al.Восполнение НАД увеличивает продолжительность жизни и продолжительность здоровья в моделях атаксии и телеангиэктазии за счет митофагии и восстановления ДНК. Cell Metab. 24 , 566–581 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gong, B. et al. Никотинамид рибозид восстанавливает познавательную способность посредством активации пролифератора-активируемого рецептора-γ, коактиватора 1α, регулируемого деградацией β-секретазы 1 и экспрессии митохондриальных генов на моделях мышей с болезнью Альцгеймера. Neurobiol. Старение 34 , 1581–1588 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Schöndorf, D. C. et al. Никотинамид рибозид-предшественник NAD + устраняет митохондриальные дефекты и потерю нейронов в iPSC и моделях болезни Паркинсона на мухах. Cell Rep. 23 , 2976–2988 (2018).
PubMed Google ученый
Биркмайер, Дж. Г., Вреко, К., Волк, Д. и Биркмайер, В. Никотинамид адениндинуклеотид (НАДН) — новый терапевтический подход к болезни Паркинсона. Сравнение перорального и парентерального применения. Acta Neurol. Сканд. Дополнение 146 , 32–35 (1993).
CAS PubMed Google ученый
Harlan, B.A. et al. Оценка пути биосинтеза НАД у пациентов с БАС и влияние модуляции уровней НАД на мышах с БАС, связанным с hSOD1. Exp. Neurol. 327 , 113219 (2020).
CAS PubMed Google ученый
Salvadores, N., Sanhueza, M., Manque, P. & Court, F. A. Дегенерация аксонов во время старения и ее функциональная роль в нейродегенеративных расстройствах. Перед. Neurosci. 11 , 451 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Лингор, П., Кох, Дж. К., Тонгес, Л. и Бэр, М. Дегенерация аксонов как терапевтическая мишень в ЦНС. Cell Tissue Res. 349 , 289–311 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gilley, J. & Coleman, M. P. Эндогенный Nmnat2 является важным фактором выживания для поддержания здоровых аксонов. PLoS Biol. 8 , e1000300 (2010).
PubMed PubMed Central Google ученый
Loreto, A. et al. Нарушение митохондрий активирует валлеровский путь за счет истощения NMNAT2, что приводит к зависимой от SARM1 дегенерации аксонов. Neurobiol. Дис. 134 , 104678 (2020).
CAS PubMed Google ученый
Wang, J. et al. Локальный механизм опосредует НАД-зависимую защиту от дегенерации аксонов. J. Cell Biol. 170 , 349–355 (2005).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Араки Т., Сасаки Ю. и Милбрандт Дж. Повышенный ядерный биосинтез НАД и активация SIRT1 предотвращают дегенерацию аксонов. Наука 305 , 1010–1013 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Sasaki, Y., Nakagawa, T., Mao, X., DiAntonio, A. & Milbrandt, J. NMNAT1 ингибирует дегенерацию аксонов посредством блокады SARM1-опосредованного истощения NAD. eLife 5 , e19749 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Гилли, Дж., Адальберт, Р., Ю., Г. и Колман, М. П. Восстановление периферических дефектов и дефектов аксонов ЦНС у мышей, лишенных NMNAT2. J. Neurosci. 33 , 13410–13424 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Гилли Дж., Орсомандо Г., Насименто-Феррейра И.& Coleman, M. P. Отсутствие SARM1 спасает развитие и выживание NMNAT2-дефицитных аксонов. Cell Rep. 10 , 1974–1981 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Geisler, S. et al. Генная терапия, направленная на SARM1, блокирует патологическую дегенерацию аксонов у мышей. J. Exp. Med. 216 , 294–303 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Китаока, Ю. и др. Защита аксонов за счет сверхэкспрессии Nmnat3 с участием аутофагии в дегенерации зрительного нерва. Cell Death Dis. 4 , e860 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Яхата, Н., Юаса, С. и Араки, Т. Экспрессия никотинамидмононуклеотида аденилилтрансферазы в митохондриальном матриксе задерживает валлеровскую дегенерацию. J. Neurosci. 29 , 6276–6284 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Pellegatta, M. & Taveggia, C. Комплексная работа протеаз и секретаз при валлеровской дегенерации: помимо нейрегулина-1. Перед. Клетка. Neurosci. 13 , 93 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Conforti, L., Gilley, J. & Coleman, M.П. Валлеровская дегенерация: новый путь гибели аксонов, связывающий травму и болезнь. Нат. Rev. Neurosci. 15 , 394–409 (2014).
CAS PubMed Google ученый
Williams, P. A. et al. Никотинамид и WLD действуют вместе, чтобы предотвратить нейродегенерацию при глаукоме. Перед. Neurosci. 11 , 232 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Brown, K. D. et al. Активация SIRT3 предшественником никотинамида рибозида NAD + защищает от потери слуха, вызванной шумом. Cell Metab. 20 , 1059–1068 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Стефано М. Д. и др. Повышение уровня никотинамидмононуклеотида-предшественника НАД (NMN) после повреждения способствует дегенерации аксонов. Cell Death Differ. 22 , 731–742 (2015).
PubMed Google ученый
Voorhees, J. R. et al. (-) — P7C3-S243 защищает крысиную модель болезни Альцгеймера от нервно-психических расстройств и нейродегенерации без изменения отложения амилоида или реактивной глии. Biol. Психиатрия 84 , 488–498 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Tesla, R. et al. Нейропротекторная эффективность аминопропилкарбазолов на мышиной модели бокового амиотрофического склероза. Proc. Natl Acad. Sci. США 109 , 17016–17021 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Blacher, E. et al. Патология болезни Альцгеймера ослаблена в модели мышей с дефицитом CD38. Ann. Neurol. 78 , 88–103 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Мрджен, Д.и другие. Высокомерное одноклеточное картирование иммунных клеток центральной нервной системы выявляет различные миелоидные подмножества в состоянии здоровья, старения и болезней. Иммунитет 48 , 599 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Long, A. N. et al. Влияние никотинамидмононуклеотида на респираторный дефицит митохондрий головного мозга на мышиной модели, связанной с болезнью Альцгеймера. BMC Neurol. 15 , 19 (2015).
PubMed PubMed Central Google ученый
Long, A. et al. Мыши с нокаутом CD38 демонстрируют значительную защиту от ишемического повреждения мозга, несмотря на высокий уровень поли-АДФ-рибозилирования. Neurochem. Res. 42 , 283–293 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Mayo, L. et al. Двойная роль CD38 в активации микроглии и вызванной активацией гибели клеток. J. Immunol. 181 , 92–103 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Banerjee, S. et al. CD38 / циклическая АДФ-рибоза регулирует передачу сигналов кальция в астроцитах: последствия для нейровоспаления и деменции, связанной с ВИЧ-1. J. Neuroimmune Pharmacol. 3 , 154–164 (2008).
PubMed PubMed Central Google ученый
Van Hove, H. et al. Одноклеточный атлас макрофагов мозга мыши показывает уникальные транскрипционные особенности, сформированные онтогенезом и тканевой средой. Нат. Neurosci. 22 , 1021–1035 (2019).
PubMed Google ученый
Jin, D. et al. CD38 имеет решающее значение для социального поведения, регулируя секрецию окситоцина. Nature 446 , 41–45 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Higashida, H. et al. Иммуногистохимическое, ферментативное и поведенческое исследование CD157 / BST-1 как нейрорегулятора. BMC Neurosci. 18 , 35 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Franceschi, C. & Campisi, J. Хроническое воспаление (воспаление) и его потенциальный вклад в возрастные заболевания. J. Gerontol. Биол. Sci. Med. Sci. 69 , S4 – S9 (2014).
PubMed Google ученый
Zhang, P. et al. Сенолитическая терапия облегчает старение клеток-предшественников олигодендроцитов, связанных с Aβ, и когнитивные нарушения на модели болезни Альцгеймера. Нат. Neurosci. 22 , 719–728 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Kauppinen, T. M. et al. Поли (АДФ-рибоза) полимераза-1 модулирует ответы микроглии на амилоид β. J. Нейровоспаление 8 , 152 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Bayrakdar, E. T. et al. Лечение никотинамидом снижает уровни окислительного стресса, апоптоза и активности PARP-1 в модели болезни Альцгеймера на крысах, индуцированной Aβ (1–42). Бесплатно. Радич. Res. 48 , 146–158 (2014).
Google ученый
Wu, X.-L., Wang, P., Liu, Y.-H. & Сюэ, Y.-X. Влияние ингибитора поли (АДФ-рибозы) полимеразы 3-аминобензамида на гематоэнцефалический барьер и дофаминергические нейроны крыс с липополисахаридной болезнью Паркинсона. J. Mol. Neurosci. 53 , 1–9 (2014).
CAS PubMed Google ученый
Mandir, A. S. et al. Активация поли (АДФ-рибозы) полимеразы опосредует паркинсонизм, индуцированный 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридином (МРТР). Proc. Natl Acad. Sci. США 96 , 5774–5779 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Kim, T. W. et al. АДФ-рибоза) полимераза 1 и АМФ-активированная протеинкиназа опосредуют прогрессирующую дофаминергическую дегенерацию нейронов на мышиной модели болезни Паркинсона. Cell Death Dis. 4 , e919 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hou, Y. et al. Добавка NAD нормализует ключевые особенности болезни Альцгеймера и реакции на повреждение ДНК в новой модели мышей с БА с введенным дефицитом репарации ДНК. Proc. Natl Acad. Sci. США 115 , E1876 – E1885 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Yao, Z., Yang, W., Gao, Z. & Jia, P. Мононуклеотид никотинамида ингибирует активацию JNK, чтобы обратить болезнь Альцгеймера. Neurosci.Lett. 647 , 133–140 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Wang, X., Hu, X., Yang, Y., Takata, T. & Sakurai, T. Мононуклеотид никотинамида защищает от когнитивных нарушений, вызванных β-амилоидным олигомером, и гибели нейронов. Brain Res. 1643 , 1–9 (2016).
CAS PubMed Google ученый
Chi, Y. & Sauve, A.A. Никотинамид рибозид, микроэлемент в пищевых продуктах, представляет собой витамин B3, влияющий на энергетический обмен и нейрозащиту. Curr. Opin. Clin. Nutr. Метаб. Уход 16 , 657–661 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Sorrentino, V. et al. Усиление митохондриального протеостаза снижает протеотоксичность амилоида-β. Природа 552 , 187–193 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Fang, E. F. et al. Митофагия подавляет патологию амилоида-β и тау-белка и устраняет когнитивный дефицит на моделях болезни Альцгеймера. Нат. Neurosci. 22 , 401–412 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lehmann, S., Loh, S.H.Y. и Miguel Martins, L.Усиление метаболизма спасения НАД является нейропротекторным в модели болезни Паркинсона PINK1. Biol. Открыть 6 , 141–147 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Jia, H. et al. Высокие дозы никотинамида предотвращают окислительную дисфункцию митохондрий на клеточной модели и улучшают моторный дефицит на модели болезни Паркинсона у дрозофилы. J. Neurosci. Res. 86 , 2083–2090 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Окабе, К., Яку, К., Тобе, К. и Накагава, Т. Влияние измененного метаболизма НАД на метаболические нарушения. J. Biomed. Sci. 26 , 34 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Коннелл, Н. Дж., Хауткупер, Р. Х. и Шраувен, П. Метаболизм НАД как мишень для метаболического здоровья: нашли ли мы серебряную пулю? Диабетология 62 , 888–899 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Martens, C. R. et al. Хронический прием никотинамид-рибозида хорошо переносится и повышает НАД у здоровых людей среднего и пожилого возраста. Нат. Commun. 9 , 1286 (2018).
PubMed PubMed Central Google ученый
Dollerup, O. L. et al. Рандомизированное плацебо-контролируемое клиническое исследование никотинамид рибозида у мужчин с ожирением: безопасность, чувствительность к инсулину и липидомобилизирующие эффекты. Am. J. Clin. Nutr. 108 , 343–353 (2018).
PubMed Google ученый
de la Rubia, J. E. et al. Эффективность и переносимость Eh401 при боковом амиотрофическом склерозе: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое пилотное исследование на людях. Амиотроф. Боковой склер. Лобно-височная дегенерация. 20 , 115–122 (2019).
PubMed Google ученый
Elhassan, Y. S. et al. Никотинамид рибозид усиливает метаболом НАД скелетных мышц пожилого человека и индуцирует транскриптомные и противовоспалительные сигнатуры. Cell Rep. 28 , 1717–1728.e6 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Беленький П. и др. Никотинамид рибозид способствует подавлению Sir2 и увеличивает продолжительность жизни через пути Nrk и Urh2 / Pnp1 / Meu1 к NAD + . Cell 129 , 473–484 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Mouchiroud, L. et al. Путь NAD + / сиртуин модулирует продолжительность жизни посредством активации митохондриальной UPR и передачи сигналов FOXO. Cell 154 , 430–441 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Schmeisser, K. et al. Роль сиртуинов в регуляции продолжительности жизни связана с метилированием никотинамида. Нат. Chem. Биол. 9 , 693–700 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gallo, C. M., Smith, D. L. Jr & Smith, J. S. Клиренс никотинамида с помощью Pnc1 напрямую регулирует Sir2-опосредованное молчание и продолжительность жизни. Мол. Клетка. Биол. 24 , 1301–1312 (2004).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Saldeen, J., Tillmar, L., Karlsson, E. & Welsh, N. Опосредованное никотинамидом и каспазой ингибирование поли (АДФ-рибоза) полимеразы связано с p53-независимым клеточным циклом (G2 ) арест и апоптоз. Мол. Клетка. Biochem. 243 , 113–122 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Авалос, Дж. Л., Бевер, К. М. и Волбергер, С. Механизм ингибирования сиртуина никотинамидом: изменение косубстратной специфичности NAD + фермента Sir2. Мол. Ячейка 17 , 855–868 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Hwang, E. S. & Song, S. B. Возможные побочные эффекты высоких доз никотинамида: механизмы и оценка безопасности. Биомолекулы 10 , 387 (2020).
Google ученый
Fang, E. F. et al. Увеличение НАД восстанавливает митофагию и ограничивает ускоренное старение при синдроме Вернера. Нат. Commun. 10 , 5284 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Ryu, D. et al. Восполнение NAD + улучшает мышечную функцию при мышечной дистрофии и противодействует глобальному парилированию. Sci. Transl Med. 8 , 361ra139 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Zhang, H. et al. Восполнение NAD + улучшает функцию митохондриальных и стволовых клеток и увеличивает продолжительность жизни у мышей. Наука 352 , 1436–1443 (2016).
CAS PubMed Google ученый
Миллс, К.F. et al. Длительное введение никотинамидмононуклеотида снижает физиологический спад у мышей, связанный с возрастом. Cell Metab. 24 , 795–806 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Mitchell, S.J. et al. Никотинамид улучшает аспекты продолжительности здоровья, но не продолжительности жизни мышей. Cell Metab. 27 , 667–676.e4 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gomes, A. P. et al. Снижение NAD + вызывает псевдогипоксическое состояние, нарушающее ядерно-митохондриальную связь во время старения. Cell 155 , 1624–1638 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Sims, C.A. et al. Никотинамидмононуклеотид сохраняет функцию митохондрий и увеличивает выживаемость при геморрагическом шоке. JCI Insight 3 , e120182 (2018).
PubMed Central Google ученый
Уддин, Дж. М., Янгсон, Н. А., Синклер, Д. А. и Моррис, М. Дж. Прямое сравнение краткосрочного лечения предшественником никотинамидмононуклеотида (NMN) NAD + и 6 недель упражнений у женщин с ожирением мышей. Перед. Pharmacol. 7 , 258 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Guan, Y. et al. Никотинамидмононуклеотид, предшественник НАД, снижает возрастную предрасположенность к ОПП зависимым от сиртуина-1 образом. J. Am. Soc. Нефрол. 28 , 2337–2352 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lee, C. F. et al. Нормализация окислительно-восстановительного баланса NAD + при сердечной недостаточности. Тираж 134 , 883–894 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lin, J. B. et al. NAMPT-опосредованный биосинтез NAD + необходим для зрения у мышей. Cell Rep. 17 , 69–85 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Martin, A. S. et al. Никотинамидмононуклеотид требует SIRT3 для улучшения сердечной функции и биоэнергетики в модели кардиомиопатии с атаксией Фридрейха. JCI Insight 2 , e93885 (2017).
PubMed Central Google ученый
de Picciotto, N.E. et al. Добавка никотинамидмононуклеотида обращает вспять сосудистую дисфункцию и окислительный стресс у мышей со старением. Ячейка старения 15 , 522–530 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Tarantini, S. et al. Добавка никотинамидмононуклеотида (NMN) восстанавливает функцию эндотелия сосудов головного мозга и нервно-сосудистую связь, а также улучшает когнитивные функции у старых мышей. Редокс Биол. 24 , 101192 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Das, A. et al. Нарушение эндотелиальной сигнальной сети NAD + -H 2 S является обратимой причиной старения сосудов. Cell 173 , 74–89.e20 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Giroud-Gerbetant, J. et al. Восстановленная форма никотинамид рибозида определяет новый путь биосинтеза НАД и действует как пероральный биодоступный предшественник НАД. Мол. Метаб. 30 , 192–202 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Yang, Y., Zhang, N., Zhang, G. & Sauve, A. A. Спасение NRH и преобразование в NAD требует активности киназы NRH с помощью аденозинкиназы. Нат. Метаб. 2 , 364–379 (2020).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Zhou, T. et al. Структура никотинамид / мононуклеотид-аденилтрансферазы никотиновой кислоты человека. Основа двойной субстратной специфичности и активации онколитического агента тиазофурина. J. Biol. Chem. 277 , 13148–13154 (2002).
CAS PubMed Google ученый
Wang, G. et al. P7C3 нейропротекторные химические вещества действуют, активируя ограничивающий скорость фермент в спасении НАД. Cell 158 , 1324–1334 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gardell, S.J. et al. Повышение НАД с помощью небольшой молекулы, активирующей НАМТ. Нат. Commun. 10 , 3241 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Кацюба Э. и др. Синтез НАД de novo улучшает функцию митохондрий и улучшает здоровье. Nature 563 , 354–359 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Diaz-Ruiz, A. et al. Преимущества ограничения калорийности для долголетия и химически индуцированного туморогенеза передаются независимо от NQO1. J. Gerontol. Биол. Sci. Med. Sci. 74 , 155–162 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Kim, H.-J. и другие. Увеличение клеточного НАД под действием фермента NQO1 улучшает возрастное нарушение слуха. Ячейка старения 18 , e13016 (2019).
PubMed PubMed Central Google ученый
Lee, J.-S. и другие. Бета-лапахон, модулятор метаболизма НАД, предотвращает ухудшение здоровья у старых мышей. PLoS ONE 7 , e47122 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Morales, J. et al. Обзор механизмов действия поли (АДФ-рибоза) полимеразы (PARP) и обоснование для нацеливания при раке и других заболеваниях. Crit. Преподобный Эукариот. Gene Expr. 24 , 15–28 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Xia, Q. et al. Ингибирование PARP-1 сокращает продолжительность жизни гипергликемических C. elegans и улучшает секрецию GLP-1 в клетках человека. Aging Dis. 9 , 17 (2018).
PubMed PubMed Central Google ученый
Brown, J. S., Kaye, S. B. & Yap, T. A. Ингибиторы PARP: гонка продолжается. Br. J. Cancer 114 , 713–715 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Alano, C.C. et al. Истощение NAD + необходимо и достаточно для опосредованной поли (АДФ-рибоза) полимеразы-1 гибели нейронов. J. Neurosci. 30 , 2967–2978 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Almeida, G. S. et al. Ингибитор PARP рукапариб вызывает изменения уровней НАД в клетках и тканях печени по оценке MRS. ЯМР Биомед . https://doi.org/10.1002/nbm.3736 (2017).
Мэтьюз, М. Т. и Берк, Б. С. Ингибирование PARP-1 предотвращает вызванную окислительным и нитрозативным стрессом гибель эндотелиальных клеток посредством трансактивации рецептора 2 VEGF. Артериосклер. Тромб. Васк. Биол. 28 , 711–717 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Escande, C. et al. Флавоноид апигенин является ингибитором NAD + ase CD38: влияние на клеточный метаболизм NAD +, ацетилирование белка и лечение метаболического синдрома. Диабет 62 , 1084–1093 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Ogura, Y., Kitada, M., Xu, J., Monno, I. & Koya, D. Ингибирование CD38 апигенином снижает митохондриальный окислительный стресс за счет восстановления внутриклеточного отношения NAD / NADH и активности Sirt3 в почечных канальцевых клетках диабетических крыс. Старение 12 , 11325–11336 (2020).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Бослетт, Дж., Хеманн, К., Чжао, Ю. Дж., Ли, Х.-К. & Zweier, J. L. Лютеолинидин защищает постишемическое сердце посредством ингибирования CD38 с сохранением NAD (P) (H). J. Pharmacol. Exp. Ther. 361 , 99–108 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Taliou, A., Zintzaras, E., Lykouras, L. и Francis, K. Открытое пилотное исследование состава, содержащего противовоспалительный флавоноид лютеолин, и его влияние на поведение детей с расстройствами аутистического спектра. Clin. Ther. 35 , 592–602 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Haffner, C.D. et al. Открытие, синтез и биологическая оценка тиазолохин (аз) олин (он) эфиров как сильнодействующих ингибиторов CD38. J. Med. Chem. 58 , 3548–3571 (2015).
CAS PubMed Google ученый
Boslett, J., Reddy, N., Alzarie, Y. A. & Zweier, J. L. Ингибирование CD38 тиазолохином (аз) олином (on) e 78c защищает сердце от постишемического повреждения. J. Pharmacol. Exp. Ther. 369 , 55–64 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Чини, Э. Н., Чини, К. С. С., Эспиндола Нетто, Дж. М., де Оливейра, Г. К. и ван Скутен, В. Фармакология CD38 / NADase: новая мишень при раке и болезнях старения. Trends Pharmacol. Sci. 39 , 424–436 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Liu, D. et al. Никотинамид предотвращает патологию и снижение когнитивных функций у мышей с болезнью Альцгеймера: доказательства улучшения биоэнергетики нейронов и процесса аутофагии. Neurobiol. Старение 34 , 1564–1580 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Park, J. H., Long, A., Owens, K. & Kristian, T. Мононуклеотид никотинамида ингибирует постишемическую деградацию NAD + и значительно уменьшает повреждение головного мозга после глобальной церебральной ишемии. Neurobiol. Дис. 95 , 102–110 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Wei, C.-C. и другие. Никотинамидмононуклеотид ослабляет повреждение головного мозга после внутримозгового кровоизлияния за счет активации сигнального пути Nrf2 / HO-1. Sci. Отчет 7 , 717 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Wei, C.-C. и другие. Восполнение НАД никотинамидмононуклеотидом защищает целостность гематоэнцефалического барьера и ослабляет замедленную геморрагическую трансформацию, вызванную тканевым активатором плазминогена, после церебральной ишемии. Br. J. Pharmacol. 174 , 3823–3836 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
North, B.J. et al. SIRT2 побуждает киназу контрольной точки BubR1 увеличивать продолжительность жизни. EMBO J. 33 , 1438–1453 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Фредерик Д.W. et al. Потеря гомеостаза НАД приводит к прогрессирующей и обратимой дегенерации скелетных мышц. Cell Metab. 24 , 269–282 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gariani, K. et al. Вызвание митохондриального ответа на развернутый белок за счет пополнения запасов никотинамидадениндинуклеотида обращает вспять жировую болезнь печени у мышей. Гепатология 63 , 1190–1204 (2016).
CAS PubMed Google ученый
Lee, H.J., Hong, Y.-S., Jun, W. & Yang, S.J. Никотинамид рибозид ослабляет печеночное метафоспаление путем модуляции инфламмасомы NLRP3 на модели диабета 2 типа на грызунах. J. Med. Продукты питания 18 , 1207–1213 (2015).
CAS PubMed Google ученый
Mukherjee, S. et al.Биосинтез никотинамидадениндинуклеотида способствует регенерации печени. Гепатология 65 , 616–630 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Hamity, M. V. et al. Никотинамид рибозид, форма витамина B3 и предшественника NAD + , снимает ноцицептивные и аверсивные размеры индуцированной паклитакселом периферической невропатии у самок крыс. Боль 158 , 962–972 (2017).
CAS PubMed Google ученый
Trammell, S.A.J. et al. Никотинамид рибозид противодействует диабету 2 типа и нейропатии у мышей. Sci. Отчет 6 , 26933 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Fang, Q. et al. HSP90 регулирует репарацию ДНК посредством взаимодействия между XRCC1 и ДНК-полимеразой β. Нат. Commun. 5 , 5513 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Ratajczak, J. et al. NRK1 контролирует метаболизм никотинамидмононуклеотида и никотинамидрибозида в клетках млекопитающих. Нат. Commun. 7 , 13103 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Grozio, A. et al. Slc12a8 является переносчиком мононуклеотида никотинамида. Нат. Метаб. 1 , 47–57 (2019). В этой статье описывается открытие и характеристика нового транспортера NMN у млекопитающих .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Berger, F., Lau, C., Dahlmann, M. & Ziegler, M. Субклеточная компартментация и дифференциальные каталитические свойства трех изоформ никотинамидмононуклеотида аденилилтрансферазы человека. J. Biol. Chem. 280 , 36334–36341 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Zhang, X. et al. Структурная характеристика цитозольной аденилилтрансферазы NMN / NaMN человека и участие в биосинтезе NAD человека. J. Biol. Chem. 278 , 13503–13511 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Кох-Нольте, Ф., Фишер, С., Хааг, Ф. и Циглер, М. Компартментация NAD + -зависимой передачи сигналов. FEBS Lett. 585 , 1651–1656 (2011).
CAS PubMed Google ученый
Yamamoto, M. et al. Nmnat3 незаменим для поддержания уровня митохондриального НАД in vivo. PLoS ONE 11 , e0147037 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Bruzzone, S. et al. Катастрофическое истощение NAD + в активированных Т-лимфоцитах за счет ингибирования Nampt снижает демиелинизацию и инвалидность при EAE. PLoS ONE 4 , e7897 (2009 г.).
PubMed PubMed Central Google ученый
Yang, H. et al. Уровни NAD + в митохондриях, чувствительных к питательным веществам, определяют выживаемость клеток. Cell 130 , 1095–1107 (2007).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Пиллаи, Дж. Б., Исбатан, А., Имаи, С.-И. & Gupta, M. P. Зависимая от поли (АДФ-рибоза) полимераза-1 гибель клеток сердечных миоцитов во время сердечной недостаточности опосредуется истощением NAD + и снижением активности деацетилазы Sir2alpha. J. Biol. Chem. 280 , 43121–43130 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Луо, X. и Краус, В. Л. О PAR с PARP: передача сигналов клеточного стресса через поли (АДФ-рибозу) и PARP-1. Genes Dev. 26 , 417–432 (2012).
PubMed PubMed Central Google ученый
Револло, Дж. Р., Гримм, А. А. и Имаи, С.-И. Путь биосинтеза НАД, опосредованный никотинамидфосфорибозилтрансферазой, регулирует активность Sir2 в клетках млекопитающих. J. Biol. Chem. 279 , 50754–50763 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Wang, T. et al. Структура Nampt / PBEF / висфатина, биосинтетического фермента NAD + млекопитающих. Нат. Struct. Мол. Биол. 13 , 661–662 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Yoon, M. J. et al. SIRT1-опосредованная секреция eNAMPT из жировой ткани регулирует гипоталамический NAD + и функцию у мышей. Cell Metab. 21 , 706–717 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Sociali, G. et al. Активность деацетилазы SIRT6 регулирует активность NAMPT и пулы NAD (P) (H) в раковых клетках. FASEB J. 33 , 3704–3717 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Yoshida, M. et al.ENAMPT, содержащий внеклеточные везикулы, замедляет старение и увеличивает продолжительность жизни мышей. Cell Metab. 30 , 329–342.e5 (2019). Эта статья демонстрирует присутствие каталитически активного внеклеточного NAMPT в экзосомах и новый паракринный механизм биосинтеза NAD + .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Самал, Б.и другие. Клонирование и характеристика кДНК, кодирующей новый фактор увеличения колоний человеческих пре-В-клеток. Мол. Клетка. Биол. 14 , 1431–1437 (1994).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Garten, A. et al. Физиологические и патофизиологические роли метаболизма NAMPT и NAD. Нат. Rev. Endocrinol. 11 , 535–546 (2015).
CAS PubMed Google ученый
Kieswich, J. et al. Мономерный eNAMPT в развитии экспериментального диабета у мышей: потенциальная цель для лечения диабета 2 типа. Диабетология 59 , 2477–2486 (2016).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hara, N., Yamada, K., Shibata, T., Osago, H. & Tsuchiya, M. Никотинамидфосфорибозилтрансфераза / висфатин не катализирует образование никотинамидмононуклеотида в плазме крови. PLoS ONE 6 , e22781 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Pissios, P. Никотинамид N-метилтрансфераза: больше, чем фермент клиренса витамина B3. Trends Endocrinol. Метаб. 28 , 340–353 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Краус, Д.и другие. Нокдаун никотинамид-N-метилтрансферазы защищает от ожирения, вызванного диетой. Nature 508 , 258–262 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Komatsu, M. et al. Активация NNMT может способствовать развитию ожирения печени, модулируя метаболизм NAD. Sci. Отчет 8 , 8637 (2018).
PubMed PubMed Central Google ученый
Rudolphi, B. et al. Масса тела определяет активность никотинамид-N-метилтрансферазы в мышином жире. Endocr. Res. 43 , 55–63 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Hong, S. et al. Никотинамид-N-метилтрансфераза регулирует метаболизм питательных веществ в печени посредством стабилизации белка Sirt1. Нат. Med. 21 , 887–894 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gokarn, R. et al. Долгосрочные диетические макроэлементы и экспрессия печеночных генов у стареющих мышей. J. Gerontol. Биол. Sci. Med. Sci. 73 , 1618–1625 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Neelakantan, H. et al. Низкомолекулярный ингибитор никотинамид-N-метилтрансферазы активирует стареющие стволовые клетки мускулов и улучшает регенеративную способность стареющих скелетных мышц. Biochem. Pharmacol. 163 , 481–492 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hoxhaj, G. et al. Прямая стимуляция синтеза НАДФ посредством Akt-опосредованного фосфорилирования НАД-киназы. Наука 363 , 1088–1092 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Баар, Э. Л., Карбахал, К. А., Онг, И. М. и Ламминг, Д. В. Половые и тканеспецифические изменения в передаче сигналов mTOR с возрастом у мышей C57BL / 6J. Ячейка старения 15 , 155–166 (2016).
CAS PubMed Google ученый
Срок действия | Райт Ортодонтия
Считается, что при использовании этого веб-сайта вы прочитали и согласились со следующими условиями:Следующая терминология применяется к настоящим Положениям и условиям, Заявлению о конфиденциальности и Уведомлению об отказе от ответственности, а также к любым или всем Соглашениям: «Клиент», «Вы» и «Ваш» относится к вам, лицу, осуществляющему доступ к этому веб-сайту и принимающему условия и положения Компании.«Компания», «Мы», «Мы» и «Нас» относится к нашей компании. «Сторона», «Стороны» или «Мы» относится как к Клиенту, так и к нам, либо к Клиенту или к нам самим. Все условия относятся к предложению, принятию и рассмотрению платежа, необходимому для осуществления процесса оказания нашей помощи Клиенту наиболее подходящим способом, будь то официальные встречи фиксированной продолжительности или любые другие средства, специально предназначенные для удовлетворения Потребности Клиента в отношении предоставления заявленных услуг / продуктов Компании в соответствии с действующим английским законодательством.Любое использование вышеуказанной терминологии или других слов в единственном числе, множественном числе, с заглавной буквы и / или он / она или они считаются взаимозаменяемыми и, следовательно, относятся к ним.
Заявление о конфиденциальности
Мы стремимся защищать вашу конфиденциальность. Уполномоченные сотрудники компании по принципу служебной необходимости используют только любую информацию, полученную от индивидуальных клиентов. Мы постоянно проверяем наши системы и данные, чтобы обеспечить наилучшее обслуживание наших клиентов.Парламент ввел конкретные составы преступлений за несанкционированные действия против компьютерных систем и данных. Мы будем расследовать любые такие действия с целью судебного преследования и / или возбуждения гражданского судопроизводства для взыскания убытков с виновных.
Конфиденциальность
Мы зарегистрированы в соответствии с Законом о защите данных 1998 года, и поэтому любая информация, касающаяся Клиента и их соответствующих Клиентских записей, может быть передана третьим лицам. Однако записи Клиента считаются конфиденциальными и поэтому не будут переданы третьим лицам, если это не требуется по закону соответствующим органам.Клиенты имеют право запросить просмотр и копии любых и всех клиентских записей, которые мы храним, при условии, что мы получим разумное уведомление о таком запросе. Просим клиентов сохранять копии любой литературы, выпущенной в связи с предоставлением наших услуг. При необходимости мы будем выдавать Клиенту соответствующую письменную информацию, раздаточные материалы или копии записей в рамках согласованного контракта в интересах обеих сторон. Мы не будем продавать, передавать или сдавать в аренду вашу личную информацию третьим лицам или использовать ваш адрес электронной почты для нежелательной почты.Любые электронные письма, отправленные этой Компанией, будут связаны только с предоставлением согласованных услуг и продуктов.
Исключения и ограничения в отношении отказа от ответственности
Информация на этом веб-сайте предоставляется «как есть». В максимальной степени, разрешенной законом, эта Компания: исключает все заявления и гарантии, относящиеся к этому веб-сайту и его содержанию, или которые могут быть предоставлены любыми аффилированными лицами или любой другой третьей стороной, в том числе в отношении любых неточностей или упущений на этом веб-сайте. и / или литература Компании; и исключает всякую ответственность за ущерб, возникший в результате или в связи с использованием вами этого веб-сайта.Это включает в себя, помимо прочего, прямые убытки, потерю бизнеса или прибыли (независимо от того, была ли потеря такой прибыли предсказуемой, возникла ли она при нормальном ходе событий или вы уведомили эту Компанию о возможности таких потенциальных убытков), причиненный ущерб к вашему компьютеру, компьютерному программному обеспечению, системам и программам и данным на них, а также за любой другой прямой или косвенный, косвенный или случайный ущерб. Однако эта Компания не исключает ответственности за смерть или телесные повреждения, вызванные ее халатностью.Вышеуказанные исключения и ограничения применяются только в той степени, в которой это разрешено законом. Ни одно из ваших законных прав как потребителя не нарушается.
Платеж
Все основные кредитные / дебетовые карты являются приемлемыми способами оплаты. Наши Условия предусматривают оплату в полном объеме в течение пяти дней после даты истечения срока индивидуального контракта. Все товары остаются собственностью Компании до полной оплаты. По остаткам, остающимся непогашенными до установленного срока, будет взиматься плата за просрочку платежа в размере 35,00 долларов США до тех пор, пока остаток не будет выплачен полностью и окончательно.Мы оставляем за собой право требовать взыскания любых денежных средств, оставшихся неуплаченными в течение девяноста дней с даты выставления счета, через агентства по сбору платежей и / или через суд мелких тяжб. В таких обстоятельствах вы несете ответственность за все дополнительные административные и / или судебные издержки.
При возврате чека взимается комиссия в размере 35 долларов США для покрытия банковских комиссий и административных расходов. В случае второго возвращенного чека мы оставляем за собой право расторгнуть договор и, в случае согласия, настаивать только на будущих денежных операциях.Следовательно, все бронирования и / или заключенные транзакции и соглашения немедленно прекращаются до тех пор, пока не будут полностью возмещены все непогашенные суммы.
Политика отмены
Если вы хотите отказаться от ортодонтических услуг, необходимо письменное уведомление об отмене как минимум за 30 дней. Уведомление лично, по электронной почте и / или факсу принимается при условии письменного подтверждения. Мы оставляем за собой право взимать дополнительные сборы для покрытия любых последующих административных расходов.
Расторжение соглашений и политика возврата
И Клиент, и мы имеем право расторгнуть любое Соглашение об услугах по любой причине, включая прекращение услуг, которые уже выполняются. Возврат денежных средств не предоставляется, если Услуга считается начатой и, во всех смыслах, в процессе. Дополнительные деньги могут потребоваться с Клиента за уже оказанные услуги.
Наличие
Если не указано иное, услуги, представленные на этом веб-сайте, доступны только в США.Вся реклама предназначена исключительно для рынка США. Вы несете единоличную ответственность за оценку пригодности для конкретной цели любых загрузок, программ и текста, доступных через этот сайт. Распространение или переиздание любой части этого сайта или его содержания запрещено, в том числе путем создания фреймов или других подобных или любых других средств, без явного письменного согласия Компании. Компания не гарантирует, что обслуживание с этого сайта будет бесперебойным, своевременным или безошибочным, хотя оно предоставляется наилучшим образом.Используя эту услугу, вы тем самым освобождаете эту Компанию, ее сотрудников, агентов и аффилированных лиц от любых убытков или ущерба, каким бы образом они ни были вызваны.
Файлы журнала
Мы используем IP-адреса для анализа тенденций, администрирования сайта, отслеживания перемещений пользователей и сбора широкой демографической информации для совокупного использования. IP-адреса не связаны с личной информацией. Кроме того, для системного администрирования, выявления моделей использования и устранения неполадок наши веб-серверы автоматически регистрируют стандартную информацию доступа, включая тип браузера, время доступа / открытую почту, запрашиваемый URL-адрес и URL-адрес перехода.Эта информация не передается третьим лицам и используется только в рамках данной Компании в служебных целях. Любая индивидуально идентифицируемая информация, связанная с этими данными, никогда не будет использоваться иначе, чем указано выше, без вашего явного разрешения.
Файлы cookie
Как и большинство интерактивных веб-сайтов, этот веб-сайт [или интернет-провайдер] компании использует файлы cookie, чтобы мы могли получать информацию о пользователях при каждом посещении. Файлы cookie используются в некоторых областях нашего сайта для обеспечения функциональности этой области и простоты использования для тех людей, которые ее посещают.Некоторые из наших аффилированных партнеров также могут использовать файлы cookie.
Ссылки на этот сайт
Вы не можете создавать ссылку на любую страницу этого веб-сайта без нашего предварительного письменного согласия. Если вы создаете ссылку на страницу этого веб-сайта, вы делаете это на свой страх и риск, и исключения и ограничения, изложенные выше, будут применяться к использованию вами этого веб-сайта путем ссылки на него.
Ссылки с этого веб-сайта
Мы не отслеживаем и не просматриваем содержимое веб-сайтов других лиц, на которые есть ссылки с этого веб-сайта.Выраженные мнения или материалы, представленные на таких веб-сайтах, не обязательно разделяются или одобряются нами, и мы не должны рассматриваться как издатели таких мнений или материалов. Имейте в виду, что мы не несем ответственности за политику конфиденциальности или содержание этих сайтов. Мы призываем наших пользователей быть в курсе, когда они покидают наш сайт, и читать заявления о конфиденциальности этих сайтов. Вы должны оценить безопасность и надежность любого другого сайта, подключенного к этому сайту или доступного через этот сайт самостоятельно, прежде чем раскрывать им какую-либо личную информацию.Эта Компания не несет никакой ответственности за любые убытки или ущерб, каким бы образом они ни были вызваны в результате раскрытия вами личной информации третьим лицам.
Уведомление об авторских правах
Авторское право и другие соответствующие права интеллектуальной собственности существуют на весь текст, относящийся к услугам Компании, и к полному содержанию этого веб-сайта. Логотип этой компании является зарегистрированным товарным знаком этой компании в США. Торговые марки и конкретные услуги этой компании, представленные на этом веб-сайте, являются товарными знаками.
Связь
У нас есть несколько разных адресов электронной почты для разных запросов. Эту и другую контактную информацию можно найти по нашей ссылке Свяжитесь с нами на нашем веб-сайте, в литературе Компании или по указанным телефонным, факсимильным или мобильным телефонным номерам Компании.
Отказ от прав
Неспособность любой из Сторон настаивать на строгом выполнении любого положения настоящего или любого Соглашения или неисполнение любой из Сторон любого права или средства правовой защиты, на которые она или они имеют право по настоящему Соглашению, не является отказом от этого и не является причиной уменьшение обязательств по настоящему или любому Соглашению.Никакой отказ от любого из положений этого или любого Соглашения не будет иметь силы, если он прямо не заявлен как таковой и не подписан обеими Сторонами.
Общие
Настоящие положения и условия регулируются законами США. Заходя на этот сайт, вы соглашаетесь с этими условиями и исключительной юрисдикцией судов во всех спорах, возникающих в связи с таким доступом. Если какое-либо из этих условий будет признано недействительным или не имеющим исковой силы по какой-либо причине (включая, помимо прочего, исключения и ограничения, изложенные выше), то недействительное или неисполнимое положение будет исключено из этих условий, а остальные условия будут продолжать применяться.Неспособность Компании обеспечить соблюдение любого из положений, изложенных в настоящих Условиях и любом Соглашении, или неисполнение любого варианта расторжения, не должно толковаться как отказ от таких положений и не влияет на действительность настоящих Положений и условий. или любого Соглашения или любой его части, или права после этого обеспечивать соблюдение всех без исключения положений. Настоящие Условия не могут быть изменены, изменены, изменены или дополнены кроме как в письменной форме и подписаны должным образом уполномоченными представителями Компании.
Уведомление об изменениях
Компания оставляет за собой право время от времени изменять эти условия по своему усмотрению, и дальнейшее использование вами сайта будет означать ваше согласие с любыми изменениями этих условий. Если произойдут какие-либо изменения в нашей политике конфиденциальности, мы объявим, что эти изменения были внесены на нашу домашнюю страницу и на другие ключевые страницы нашего сайта. Если произойдут какие-либо изменения в том, как мы используем Личную информацию клиентов нашего сайта, будет отправлено уведомление по электронной или обычной почте тем, кого коснется это изменение.Любые изменения в нашей политике конфиденциальности будут опубликованы на нашем веб-сайте за 30 дней до того, как эти изменения вступят в силу. Поэтому рекомендуется регулярно перечитывать это заявление.
Эти условия являются частью Соглашения между Клиентом и Компанией. Ваш доступ к этому веб-сайту и / или обязательство по бронированию или соглашению означает ваше понимание, согласие и принятие Уведомления об отказе от ответственности и полных положений и условий, содержащихся в настоящем документе. Ваши законные права потребителей не затрагиваются.
© Wright Orthodontics 2014 Все права защищены
IJNS | Бесплатный полнотекстовый | Включение тестирования биомаркеров второго уровня повышает специфичность скрининга новорожденных на мукополисахаридоз типа I
1. Введение
Интерес к скринингу новорожденных на мукополисахаридоз типа I (MPS I) возрос после разработки методов скрининга сухих пятен крови [1], доступность эффективных методов лечения [2, 3] и все больше доказательств того, что раннее вмешательство улучшает исходы для пациентов [4].В начале 2016 года после систематического обзора, основанного на фактических данных, и последующего утверждения секретарем Министерства здравоохранения и социальных служб MPS I был добавлен в Рекомендуемую универсальную группу скрининга. В нескольких странах и штатах США реализуются многочисленные пилотные и полномасштабные программы скрининга с использованием измерения активности альфа-1-идуронидазы (IDUA), во многих из которых наблюдается высокий уровень ложноположительных результатов из-за перекрытия активности IDUA у здоровых людей. и пораженных пациентов и высокой частоты аллелей псевдодефицита у IDUA, что в целом приводит к низкой специфичности для MPS I [5,6,7].В то время как несколько программ внедрили молекулярное тестирование второго уровня в попытке решить проблему низкой специфичности только ферментативного скрининга, этот подход оказался проблематичным из-за обнаружения частных мутаций, вариантов неизвестной значимости, идентификации статуса носителя и ограничений использованная методика [8,9]. Кроме того, высокая частота генотипических вариантов, приводящих к псевдодефициту IDUA, приводит к чрезмерному выполнению потенциально ненужных молекулярно-генетических тестов [10].О псевдодефиците IDUA впервые сообщили в 1985 году [11], и считалось, что это редкое явление до скрининга новорожденных. Измерение гликозаминогликанов (ГАГ), в частности дерматансульфата (DS) и гепарансульфата (HS), в сухих пятнах крови. несколько методологий использовались для оценки пациентов из группы риска, а также для первичного скрининга новорожденных на МПС I [12,13,14]. Имея как пренатальные доказательства накопления ГАГ [15], так и подтверждение того, что уровни DS и HS могут точно отличать новорожденных с тяжелыми и ослабленными формами MPS I от здоровых новорожденных [12], внедрение тестирования биомаркеров в период новорожденности является следующим логическим шагом к устранение недостатков, присущих скринингу ферментов и молекулярному тестированию второго уровня.Наша лаборатория разработала поэтапный подход к скринингу новорожденных на MPS I, включив тестирование биомаркеров второго уровня GAG, DS и HS после выявления снижения активности IDUA. При тестировании второго уровня используется исходный образец для скрининга новорожденного, что исключает возможность вызова ребенка для дополнительного тестирования [16]. Эта модель снижает количество ложноположительных результатов и повышает специфичность скрининга новорожденных не только на МПС I [10], но и на другие состояния [16].Тестирование GAG сухих пятен крови также может проводиться в клинических условиях для оценки новорожденных с положительным результатом скрининга, направленных в рамках соответствующей программы скрининга новорожденных на возможное MPS I. Высушенные пятна крови являются идеальным типом проб для получения от новорожденных, поскольку сбор мочи может быть трудным. Здесь мы сообщаем о нашем опыте включения измерения DS и HS в процесс скрининга новорожденных на MPS I.4. Обсуждение
Программы скрининга новорожденных, которые включают лизосомные нарушения накопления с использованием одноуровневого ферментативного подхода, требуют, чтобы все случаи со сниженным активность фермента должна быть направлена для подтверждающего тестирования и оценки.Отчеты нескольких программ скрининга новорожденных с использованием этой модели показывают, что положительная прогностическая ценность (PPV) для скрининга новорожденных MPS I с использованием только активности фермента IDUA составляет примерно 3% [5,6]. Hopkins et al. [6] сообщает об опыте Миссури более 4 лет скрининга новорожденных на лизосомные нарушения накопления. За это время 133 ребенка из 308 000 обследованных были направлены на подтверждающее тестирование и оценку в связи со снижением активности ПИН. Из перечисленных случаев 71 случай был отнесен к псевдодефициту (1/4338), в то время как только два случая были подтверждены как MPS I (1/154 000).Аналогичные результаты были получены Burton et al. [5], при этом 151 ребенок из 219 793 прошедших скрининг был направлен на подтверждающее тестирование MPS I, а частота встречаемости 1/7326 для псевдодефицита IDUA и 1/219 793 для MPS I. Эти результаты воспроизведены в нескольких дополнительных отчетах [24,25,26, 27,28]. Поскольку общая частота псевдодефицита примерно в 16 раз выше, чем истинное заболевание, программы скрининга новорожденных и клиницисты, участвующие в оценке направленных младенцев, будут по-прежнему сталкиваться с ложноположительными результатами, если будет использоваться только ферментативный скрининг.Программы скрининга новорожденных, включающие молекулярно-генетическое тестирование второго уровня, также имеют низкую специфичность для MPS I и направляют детей из группы риска только на основании сниженного уровня α-l-идуронидазы, поскольку получение молекулярных результатов может занять несколько дней или недель. Из-за большого числа направлений, требующих молекулярного анализа второго уровня во время пилотного тестирования, программа скрининга новорожденных в Северной Каролине включила постаналитическую интерпретацию с использованием совместных лабораторных интегрированных отчетов (CLIR) в свой алгоритм тестирования, который обеспечивает анализ по запросу через Интернет с использованием доказательств: основанное на разделении лабораторных результатов от пораженных пациентов иложноположительные случаи. Хотя было показано, что это снижает количество положительных случаев скрининга на 64%, только один подтвержденный случай MPS I был идентифицирован из 19 случаев, направленных на молекулярное тестирование второго уровня IDUA [7]. С февраля 2016 года мы протестировали 1213 образцов от пациентов, которые были определены как группы риска по MPS I по результатам скрининга новорожденных. Основываясь на доступных данных последующего наблюдения, мы полагаем, что продемонстрировали, что анализ GAG пятен крови либо в первоначальной скрининговой карте новорожденных (выполняется как тест второго уровня), либо в клинически представленных образцах от младенцев со сниженной активностью IDUA, выявленных при скрининге новорожденных, точно позволяет различить между пациентами с подтвержденным МПС I и ложноположительными случаями из-за псевдодефицита или гетерозиготности IDUA.Все образцы, протестированные от младенцев, подтвержденные молекулярным анализом IDUA на наличие MPS I, имели значительно повышенные уровни DS и HS по сравнению с образцами с подтвержденным псевдодефицитом и / или гетерозиготностью IDUA. Если бы направления на скрининг новорожденных были ограничены пациентами, у которых в нашей лаборатории был выявлен повышенный уровень DS и HS, то только 23 пациентам действительно потребовалось бы генотипирование, что соответствует PPV 74% (17/23). Соответственно, мы показали на перспективной когорте, что анализ GAG пятен крови и постаналитическая интерпретация могут значительно повысить специфичность скрининга новорожденных на MPS I и должны быть включены в процесс скрининга, чтобы улучшить общую производительность программы.Недавно Бурлина и др. [29] сообщили, что ретроспективное включение анализа GAG второго уровня в сухих пятнах крови привело к 100% PPV для MPS I, с повышенными DS и HS в 2/26 случаев с положительными результатами первого уровня. Анализ нашей тестируемой популяции. и корреляция с молекулярными результатами выявила несколько ложноположительных результатов и не выявила никаких доказательств ложноотрицательных случаев на момент подачи рукописи. В то время как несколько отчетов [12,13,14] демонстрируют повышение уровня ГАГ у новорожденных с МПС, имеется мало данных об ослабленных случаях в отношении сроков накопления ГАГ и надежности скрининга новорожденных для постановки диагноза.Мы признаем возможность того, что новорожденные с ослабленным MPS I могут избежать диагностики с использованием этого алгоритма скрининга, и поэтому должны полагаться на ретроспективный и проспективный сбор данных, а также на изучение альтернативных и, возможно, более чувствительных методологий тестирования [30], чтобы устранить это ограничение в настройка скрининга новорожденных. Наши результаты показывают, что тестирование ГАГ второго уровня и постаналитическая интерпретация имеют несколько важных преимуществ по сравнению с молекулярным тестированием, такие как предотвращение ненужного отзыва пациентов, снижение стоимости анализа и времени выполнения, предотвращение идентификации псевдодефицита, носителей и случаев с неубедительными молекулярными исследованиями. результаты, которые в конечном итоге могут получить ненужное клиническое наблюдение, а также предоставить фактический биохимический фенотип метаболизма ГАГ.Поскольку молекулярный анализ сам по себе может быть ненадежным инструментом для прогнозирования тяжести заболевания, анализ ГАГ в сочетании с использованием постаналитических инструментов может помочь определить патогенность этих ужасных вариантов с неопределенной клинической значимостью. Недавняя публикация Clarke et al. [31] обсуждает сложность использования генотипической информации для прогнозирования фенотипа при MPS I, с уникальными генотипами у 12,4% и 40% пациентов с тяжелым и ослабленным MPS I, фенотипической изменчивостью, связанной с некоторыми миссенс-вариантами, и неспособностью текущих биохимических оценок к предсказать фенотип.Также важно отметить, что, хотя данные были получены из добровольного реестра пациентов, у 18 пациентов был зарегистрирован только один вариант IDUA, что подчеркивает ограничения молекулярного тестирования без сопутствующего биохимического фенотипирования как компонента скрининга новорожденных. при мукополисахаридозах происходит пренатально [15], измерение DS и HS в скрининговых пятнах крови новорожденных может успешно применяться в условиях скрининга новорожденных для состояний, отличных от MPS I.Несколько штатов недавно добавили MPS II, также известный как синдром Хантера, в свои группы тестирования, а скрининг новорожденных уже проводится в Японии и на Тайване в течение нескольких лет. Как опубликованный, так и недавний / заявленный опыт [32] показал высокий уровень ложноположительных результатов при скрининге новорожденных на MPS II, что связано с высокой частотой псевдо и псевдоподобных аллелей в гене IDS [25].Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.